关于PEG8000的配制问题

huangcong1988

不知道40%的PEG8000怎么配制，有的说是直接用去离子水配，也有说用去离子水配后加氯化镁，到底是怎么配制呢？而且PEG8000是用来浓缩核酸的么？

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huangcong1988

回复 john7812x 的帖子8 j3 t6 T" b0 z. n2 a, e9 S
# `: j* g7 l) y
文章中好像是收集慢病毒的过程吧，当然高速离心能在一定程度上提高慢病毒滴度，但是浓缩。。。

huangcong1988

回复 john7812x 的帖子
" Z) S/ n3 l) i' u/ f+ \2 a6 {
0 K1 I3 b2 \& j& @( s非常感谢！我是为了浓缩慢病毒

john7812x

回复 huangcong1988 的帖子  Q* b) b$ l! h7 N5 g

+ H. v/ B4 ]4 [7 t; N你是不是打算浓缩Lentivirus，来提高它的滴度, 为下步感染实验做准备?; \/ p- P% O0 i! D9 b; H
还是要浓缩Lentivirus 的RNA？, O5 X+ J9 [9 k% P
( Y" O! h8 N1 X+ a! K" b$ p/ X% U
若是为了提高病毒滴度可以超速离心的方法：, @. n% P" |4 u; f2 n
0 B$ T% e9 i) m# p/ {6 w4 |) |
若是为了浓缩RNA，可以冷冻干燥，或沉淀RNA后再溶解，等等。6 V5 x# e# K. E& w3 v, l2 K  ^& V: U
& N# H8 O1 D7 r$ o$ H/ b% D; ]6 }9 Z
补充内容 (2011-11-1 19:54):4 w6 l( A7 x8 p! ]
在这个超速离心的protocol 里用的是sucrose, 没有用PEG，可能和你实验室计划不同。

huangcong1988

回复 john7812x 的帖子" m% c9 ]2 I% H/ f8 V

7 s3 q9 N9 p- g. Z  y! E有道理，慢病毒上清要纯化的话呢？慢病毒是RNA+外壳（蛋白），那去离子水是应该用DEPC水处理一下

huangcong1988

回复 john7812x 的帖子
' Q% m5 v% y( D% n
! o8 k1 G+ P' y# ~" O& U# J! W$ d不是提RNA，是浓缩，就是已经收集的慢病毒上清，想用PEG8000纯化一下，谢谢

john7812x

回复 huangcong1988 的帖子# c8 H( N% e  A6 v; o) Q
- f. D) S  U5 Y. l: X* I
PEG8000可以纯化RNA，如网页中所述：http://www.protocol-online.org/biology-forums/posts/16186.html
+ q" P! }' C8 M/ P但是，我没有用过PEG8000提取RNA，我用试剂盒提取小量RNA，或用Trizol提取大量RNA。
  @5 T# i3 a5 S. a9 n% t9 D$ E$ D2 e& ?# i' V' u
40%（w/v）PEG8000 用去离子水配，如文件中黄色部分所示：
4 B$ z8 y0 _4 R/ p& W8 o% A. A" |* z7 r
& p- }. q8 u5 H2 Q( f+ J  k) u
假如你打算用PEG8000 提取RNA，建议用DEFC处理过的去离子水来配制。

huangcong1988

回复 zhusealin 的帖子6 [+ I  t9 F; y2 z* y/ y5 A: G
8 J, Z! [& p7 g0 @
是，PEG也用于细胞融合