成脂诱导

sarah19860420

最近诱导人的TENDON STEM CELL。成骨很容易就做出来了，为什么成脂还做不出来呢，不是说成脂也很好做的吗？大家在成脂方面有什么又到经验，希望大家分享下，帮我找出问题所在，谢谢啦。
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还有成软骨诱导，形成的pellet是应该悬浮在培养液中还是最终会贴壁的？

sarah19860420

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成脂,DMEM(L,因为我们这的一个老师说高汤低糖都没有太大影响，所以就选择了L)+10%FBS,
4 e( d5 e4 M" r0 [: p% H1uM indomethasin, 0.5mM IBMX, 10-5M的dexamethasone , Insulin 5ug/ml.- i2 O% V' J# b% Z
在这诱导过程中，细胞也死的挺多的，但是并未完全死光。是不是地塞米松的浓度太高了，我看还有用10-4M的呢。所以应该没什么问题吧。
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. l& r, }( N' a还有就是软骨诱导形成pellet如果黏在壁上，那黏住的那一部分就不会形成软骨了，对吗？

sarah19860420

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1 I! [$ s5 U1 D# q) r" q2 t7 D$ a% B' e7 k: H
你是说实验过程，还是实验配方。成脂的还是软骨的

sarah19860420

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6 b6 |6 P1 n+ N0 Q2 v8 \4 l0 C8 ]. g, _) W9 {  D% Q3 j
多谢耐心回答

sarah19860420

回复 gact 的帖子" }  K* g+ {* h$ ]/ l3 w# R4 q5 g
( x/ k# `' k3 G' t
1.铺细胞，代细胞密度达到70-90%，加入分化液，之后每三天换一次液，培养21天后进行鉴定。
1 g- D  \( J& z- ]  f  ]0 F2. PBS洗，10%福尔马林固定5min/ T: T' t; g7 J0 A8 S( W2 R3 Z: k+ F
3. 水洗两次
9 }. T' Q/ {/ F* _& {2 y3.Oil Red staning.$ D. [2 w' z. Z$ I9 `9 w
4. 水洗几次。
3 d4 V: ?$ ~  ~: k, q% z2 u5.OK了。

sarah19860420

回复 luoziwei 的帖子, O3 Z- r( X* {2 \. z( V6 U
- D0 n$ M6 F' I
我想问下这里用高糖和低糖的区别？

sarah19860420

回复 luoziwei 的帖子# e6 O6 C1 @7 d0 j- Y

, N  ]0 d5 f% ~% q; Y( {5 j' C+ n最后一个问题，就是在这个分化液的DMEM+10%FBS含有抗生素会有影响吗？

sarah19860420

回复 regene 的帖子
6 t5 m! w# D7 `4 i% r, F+ I  t
" d; L7 x1 v4 z- K好的，谢谢

sarah19860420

回复 gact 的帖子3 V- x9 w4 s+ ?& q' W1 a, B6 P7 }* F
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我不做猪的MSC，我做的是人的TSC。文献报道的配方多种多样，我现在也在摸索条件。但是我之前写的那个配方是我们实验室用的都比较好的方法，你可以试试

sarah19860420

回复 regene 的帖子/ q) h) e+ s" {# X) R8 O
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这是你的经验，可否有文献给介绍一下，想了解下缘由