成脂诱导

sarah19860420

最近诱导人的TENDON STEM CELL。成骨很容易就做出来了，为什么成脂还做不出来呢，不是说成脂也很好做的吗？大家在成脂方面有什么又到经验，希望大家分享下，帮我找出问题所在，谢谢啦。" Q( l  c% {3 G2 k( n; `

$ `$ `5 Z( u" ?: i7 Q还有成软骨诱导，形成的pellet是应该悬浮在培养液中还是最终会贴壁的？

luoziwei

软骨诱导的pellet会粘在离心管底部，像换液的话直接倒培养液都不会倒出来的。你先染给我看看你的成脂肪分化培养基的配方

gact

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5 o. v- Z% |+ W9 E0 q( B我很想知道你的protocol。。

sarah19860420

回复 luoziwei 的帖子' l+ S8 f3 K; {( W
5 v# S1 s0 _  h8 w( R& T+ e
成脂,DMEM(L,因为我们这的一个老师说高汤低糖都没有太大影响，所以就选择了L)+10%FBS,6 c3 e4 i5 Z- S8 k1 w. }
1uM indomethasin, 0.5mM IBMX, 10-5M的dexamethasone , Insulin 5ug/ml.
2 M7 P' |  o, r6 B+ t, d在这诱导过程中，细胞也死的挺多的，但是并未完全死光。是不是地塞米松的浓度太高了，我看还有用10-4M的呢。所以应该没什么问题吧。
% Z% |4 B- }/ J' W8 Z
/ D% P5 K) \, f6 ~0 g# P还有就是软骨诱导形成pellet如果黏在壁上，那黏住的那一部分就不会形成软骨了，对吗？

sarah19860420

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+ w! h# ~3 f0 t- q
) K6 b1 ^& R) P- V. t你是说实验过程，还是实验配方。成脂的还是软骨的

luoziwei

回复 sarah19860420 的帖子0 M$ m+ q! r% k1 O4 Y7 ~
3 S  C, X3 Y- C  J1 Y' u
还是选择高糖吧，insulin加到10或者20，dexamethasone不算高，

luoziwei

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) `& Y! N& X; j' _, M) h8 o# N! p% p* y
刚离心下来的细胞是一片沉在管底的，培养了3天后，片状的细胞会慢慢卷起来，形成球状，大概7天后，就开始分化了。你说的黏住的那部分，只是一小部分，就像一个球放在桌面上一样，因而我猜想它还是形成软骨的，但没去证实过。

gact

sarah19860420 发表于 2011-12-30 00:37
; q: p" f2 W* \* k3 s0 ^回复 gact 的帖子
0 ^* X1 X( F+ D# K. x/ k/ a) c, ?, e" x8 N, \" c# d
你是说实验过程，还是实验配方。成脂的还是软骨的

9 t- {: G! F1 B8 h: O
more is  better

sarah19860420

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; @2 f- s  z. p1 J% k: D) P1 _/ L! t' G
多谢耐心回答

sarah19860420

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3 i8 D* s. G4 A! _% C/ H2 v0 q  m) z6 ?; M( a1 m
1.铺细胞，代细胞密度达到70-90%，加入分化液，之后每三天换一次液，培养21天后进行鉴定。) j# u9 }, y) w( j( t' ]
2. PBS洗，10%福尔马林固定5min
1 Q3 G) B3 }/ v$ D0 m9 y3. 水洗两次
8 n* Y5 ^, G+ Y1 B1 |3.Oil Red staning./ c$ z- s  ~0 |, J
4. 水洗几次。, X: T' K) _( G% @8 r
5.OK了。