成脂诱导

sarah19860420

最近诱导人的TENDON STEM CELL。成骨很容易就做出来了，为什么成脂还做不出来呢，不是说成脂也很好做的吗？大家在成脂方面有什么又到经验，希望大家分享下，帮我找出问题所在，谢谢啦。, M6 m- E) s2 R" _7 h) ~( C
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还有成软骨诱导，形成的pellet是应该悬浮在培养液中还是最终会贴壁的？

luoziwei

软骨诱导的pellet会粘在离心管底部，像换液的话直接倒培养液都不会倒出来的。你先染给我看看你的成脂肪分化培养基的配方

gact

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$ a% k, H- N7 c8 y4 c, _我很想知道你的protocol。。

sarah19860420

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$ l* ]3 F: R/ Q/ v成脂,DMEM(L,因为我们这的一个老师说高汤低糖都没有太大影响，所以就选择了L)+10%FBS,: m2 r8 ]( c; O; x/ F* N: Z& ?
1uM indomethasin, 0.5mM IBMX, 10-5M的dexamethasone , Insulin 5ug/ml.; }* _& t8 x) a8 ]6 W, j4 [3 E7 r
在这诱导过程中，细胞也死的挺多的，但是并未完全死光。是不是地塞米松的浓度太高了，我看还有用10-4M的呢。所以应该没什么问题吧。; d8 h9 m' \! ~, L7 K

8 d3 ]) U2 l9 ^/ a; M还有就是软骨诱导形成pellet如果黏在壁上，那黏住的那一部分就不会形成软骨了，对吗？

sarah19860420

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1 `$ \' I* x( @你是说实验过程，还是实验配方。成脂的还是软骨的

luoziwei

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0 n  Z! x1 w2 t) I6 }9 r
7 O" w2 M; g. {) O+ c. T还是选择高糖吧，insulin加到10或者20，dexamethasone不算高，

luoziwei

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  @- d' h9 \7 z1 t% d/ C
刚离心下来的细胞是一片沉在管底的，培养了3天后，片状的细胞会慢慢卷起来，形成球状，大概7天后，就开始分化了。你说的黏住的那部分，只是一小部分，就像一个球放在桌面上一样，因而我猜想它还是形成软骨的，但没去证实过。

gact

sarah19860420 发表于 2011-12-30 00:37 ' u, r  J/ z2 `; }. g) F
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3 C1 g0 b* |, X* Q) P1 e) |5 W. q% Q9 m( c9 X& E
你是说实验过程，还是实验配方。成脂的还是软骨的

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more is  better

sarah19860420

回复 luoziwei 的帖子0 Y- G; ~% @& s3 [
* @# e" g' w, M  k& I
多谢耐心回答

sarah19860420

回复 gact 的帖子/ b4 H+ k/ _5 [. l% n6 c' e/ q

7 [8 J* M6 \2 g  L) o9 m+ T% X1.铺细胞，代细胞密度达到70-90%，加入分化液，之后每三天换一次液，培养21天后进行鉴定。0 Y5 E0 `' Z- S0 {
2. PBS洗，10%福尔马林固定5min+ t* {) p" x1 l; _3 h
3. 水洗两次2 I9 j! \# w& P) a4 S
3.Oil Red staning.
3 K6 A( e8 |- {* M4. 水洗几次。
" O4 O' W) \0 n" E7 Q! p$ T5.OK了。