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前几天刚慢病毒做了个干扰,CMV驱动荧光,荧光有强有弱,选强的就行了,荧光看起来也挺好。
4 x; Y3 c9 R5 \' {6 x6 A1,需要的病毒滴度;8 c v3 s* v' u
---------------直接病毒液转,不测滴度
( u) D. N& @5 {4 f+ ^8 I' q2.和各个promoter的强弱关系(CMV,EF1a,CAG,H1,U6等)和它们的适用情况; ^! o7 ?% {8 M P9 q
----------个人以为绝对的强弱可能并不明显,可能跟插入位置有关,当然有人说EF1比较强。
: S# Y5 X5 L& X8 n5 {3.与基因表达后被细胞沉默相关的知识,比如说CMV转到ES之后会沉默但细胞分化后会重新开启吗?) 3 P4 x2 b' m; m8 q5 M
----------沉默为什么会影响分化呢8 H$ m6 f! Z, O2 Y7 f1 Q6 k
4,用何种protocol转染,具体程序,包括如何铺细胞,加不加MEF做feeder,加不加polybrane,转染几个小时,转后何时换液,最后何时检测阳性细胞,第一次转染一种ES的时候各种条件怎么摸(哪些条件要摸个小梯度),如何用药物筛选阳性(包括如何做药物浓度的曲线)- C c* s# _" ?3 g" A6 l
------------------加mef,不加polybrene,当然推荐加
6 J5 \* Y$ C0 N, B5 @2 c7 Y5 各种trouble shooting。
" y( y \. j" D------------------没什么trouble |
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