急求神经球荧光方案

changbo529

神经干细胞贴壁培养后72小时视野中出现如图细胞，请问这是少突- z$ z$ c/ x& @$ `& v1 q
胶质细胞吗？还有一个问题就是悬浮培养的神经球怎样做免疫荧光和计数？急求

ss安雅熙

悬浮培养的细胞 离心加NSC培养液重悬以后 放入PLL的培养板里 贴壁6小时以后行免疫荧光（时间久了容易分化） 做的时候小心清洗 防止脱片

ss安雅熙

如果原代是悬浮培养的话 离心弃掉培养液 加入PBS洗两遍以后 放入PLL包被的培养板里 然后就加入神经干细胞培养液 贴壁6小时后即可行免疫荧光 这样细胞不会分化 还能保持干细胞形态 注意做染色的时候 洗的时候要小心 千万不要脱片

mayiwaiwai

$ ~* C( e0 l7 P4 U) G) U  w- d* N$ ?3 Q& {- G2 B: p
回复 justin03 的帖子$ F0 ~7 F2 c% l0 g

$ A. Q5 L& O- M7 U! Z有没有未染色的照片可以放一张呢，我也遇到同样的问题呢，贴壁做增殖是什么样子？
+ N+ G, l& L2 D! M% G5 \

justin03

感觉楼主的图不是神经干细胞了，悬浮培养神经干细胞一般会成球的，贴壁培养的话也会成球的，细胞有短突触，不会像图片那么明显的突起的。会不会是取材或传代的过程中有接触到FBS，让细胞分化了？

jojomayer

jessewill 发表于 2012-3-26 18:00 7 G8 ^( J1 o7 L( [5 w1 w* ^
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我觉得是你的细胞状态不行了吧，也就是说你悬浮培养的神经球已经出现了一定的分化， ...

: W2 P! f1 m7 l/ |( G) Q请问一下你是如何通过镜下观察判断细胞有没有分化的？
5 _. g4 ]2 k  o( o- f' t楼主图中的细胞是什么细胞？如果细胞没有分化，镜下应该是什么样子？与分化的有什么不同？: J( l3 V( R, H! c0 P
谢谢！

jessewill

回复 changbo529 的帖子- T# H# u' i/ P, F! k  Q! ?

* x/ A" {3 }8 i: C7 O8 b: Y我觉得是你的细胞状态不行了吧，也就是说你悬浮培养的神经球已经出现了一定的分化，因此贴壁之后，你就很快看到了神经干细胞的分化。
' Y& U1 D$ T8 T2 |* N4 U  J" E. \8 U如果保持着多能型的干细胞，即使贴壁也是不会分化的。
( Q4 [; [! G3 @. L+ O9 X) B8 B所以还是从培养NSC的条件上去考虑。

jessewill

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我觉得是你的细胞状态不行了吧，也就是说你悬浮培养的神经球已经出现了一定的分化，因此贴壁之后，你就很快看到了神经干细胞的分化。
& d5 i) F3 j2 T: n& z& ]8 f# _如果保持着多能型的干细胞，即使贴壁也是不会分化的。
, b3 Y8 g( m9 O3 n0 I& z" k所以还是从培养NSC的条件上去考虑。

aifei001

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" R2 J* `0 g' \. r7 t1 G: G0 l9 {! X0 G2 `/ I4 ]/ s
谢谢。我也一样无语啊，看来还是文献看的少。希望问题都能克服！

changbo529

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% F1 n, H% _* a7 |9 |4 ]7 u2 K& J我用的是多聚赖氨酸包被，但一贴就分化，但我又不想让它分化，所以我现在也很无语