荧光原位杂交（fish）探针设计原则和方法

xxp1246087085

谢谢大家，这两天忙考试了，没上网，非常感谢

hn1022

我也要做胚胎的RNA FISH ，想请教一下protocol呀！谢谢

l19rna

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0 d- v+ \- G6 t4 X# r' r8 `不同天数的胚胎的ptotocol会有细节上的差别，我做的比较早期，建议参考nature protocol上的文章： / m9 K0 H  I' @
Title：An optimized procedure for whole-mount in situ hybridization on mouse embryos and embryoid bodies, t4 n7 g" |% m7 @

无心

无心

想了解

icebaby

做ISH，最常用的还是Riboprobe吧？我想FISH也应该是这样的。我最近要做ISH，探针的话想找个公司来做。

doctorrobin

我想请教一下想做一个对照内参探针找什么基因比较好 本人刚接触ish

细胞海洋

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: M& N3 C9 [  u3 h$ r) O
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l19rna

回复 doctorrobin 的帖子, Y1 k1 b5 w! }' K! R" G

4 @" Z/ j& B( k. Q$ V我一般是用别人已经发表的探针，而且其表达谱是公认的，才用来做阳性对照；
, {- v; x* Q  s: m阴性对照就选择cRNA的互补序列，这个在你的cRNA载体上转录出来就行。

l19rna

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" o. c7 Q* N1 L) ?: A
+ N) @  m5 ?, a* K6 d* iFISH已经有很多更高效的方法。尤其是做单细胞且定量的FISH。其探针也有很多种，除了传统的，还有50bp长度，19-24bp长度探针，等等