骨髓间充质干细胞相关问题讨论

wcforever126

小弟最近再做病人骨髓间充质干细胞培养，看了一些资料，分享一下8 V! @& T6 H) H  ?! Z
1、骨髓间充质干细胞在骨髓中含量很少，大概10的6次方骨髓单个核细胞中仅含有2-5个MSCs，故接种密度一般要在10的6次方；* j, \$ @+ f% j8 \$ c+ ]4 q$ D" J, Z
2、MSCs三天后明显看到贴壁，48小时有贴壁，7天可看到很多梭形细胞；
/ Q7 M7 u* M, X% A- U$ `3、液体培养基中的L-谷氨酰胺在你打开培养瓶盖时候大概2周会代谢消失，所以要记得2周用不完要添加. \* d! p: M. T' k! s. l" G
4、血清一定要分装，不能一整瓶今天化了，明天再冻；
* n: z3 h0 v$ g, D- ^% \5、配好的培养基一定两周内用完，2-8度保存。1 s% W2 p: \5 a: ~$ R
各位高手给些意见，及你实验过程中注意事项。

winstonsee

没有讲怎么分离的，什么分离胶？如何纯化，有没有做表面抗原鉴定

lindanmiaoyao

回复 细胞海洋 的帖子  C, V, T1 N' E. p, B

1 `( q' A1 F% @7 p# u4 @& R好的，谢谢楼主

细胞海洋

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7 m  t3 w) J& w! T9 l! `7 o. a1 U' E7 F6 d3 K
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lindanmiaoyao

你们都是做人的BM-MSC吗？有没有做猴子的？

firstaider

从安全性角度出发BM-MSC我个人认为前景更好，当然必须是自体的，通过体外扩增的，目前体外扩增的技术都不怎么好，希望有人有更好的建议

wcforever126

回复 ffkkk2007 的帖子
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8 Q: S6 @. p; G* W有利于贴壁，最好用进口的。

ffkkk2007

楼主精神可嘉，我也说一个：间充质干细胞培养应当使用树脂培养瓶，比用玻璃培养瓶的效果好很多

wcforever126

关于接种密度问题3 T, x' y/ q& ]! V: h( K  L: v
1、如果你用了细胞因子之类的，可以10的5次方/ml接种2 T# s  ]( G$ e- ^$ T
2、如果没加细胞因子，可以10的6次方接种。

wcforever126

今天说下无菌观念吧( k# Y8 |- s- |, _2 [. w8 X- {
1、进实验室要换鞋，洗手，尽管您要戴手套也要洗手，穿工作衣，最好穿长裤到脚跟；
; m3 z. n: a! r! b3 R. m2、打开超净台紫外灯30-60分钟消毒，这段时间可以把分离液及培养基从4度冰箱拿出放置室温，30-60分钟后基本上恢复室温，不用再在水浴锅里预热，防止不必要的污染。通风10分钟即可开始实验。4 V# E) t+ z1 R5 N: O. G
3、酒精消毒超净台面，外拿进来的物品酒精喷洒消毒，至于是否点酒精灯的问题，保留个人意见。
/ g- ^5 ~% }/ \; o7 }. _1 M4、操作过程中，不要混用枪头，最好自己的枪头前一天消毒，实验室人多混杂，注意保护。