成软骨诱导阿利新蓝染色

huajie881026

1 [+ t" a  l2 o* Q2 x7 |; v) \" b, z; ~# F( z+ ^
前些日子自己试着做了成软骨诱导分化，5天左右细胞成一团，随着时间慢慢变大，诱导至满28天，细胞团直径约达2mm，团块较白，感觉上是诱导成功了。昨天石蜡包埋，然后切片、脱蜡、脱水后，阿利新蓝染色30min后，拍了照片（如下图），一些疑惑请教做过成软骨诱导的大侠：5 A3 k, p# v* [" w% g) [
1、切片是不是厚了？昨天切的时候设置的是5um，但切下来的时候感觉厚了，有些地方有重叠；
- I* d7 _, `& H; S2、阿利新蓝染的是粘多糖，应该是在外周部分还是中间部分？' Y% d% e' b3 _' C+ U6 x4 t
100×
# y) q5 w1 S5 L) V$ U* U; e7 h, z" E8 X# Q, [( i
200×
* C3 H" e% k' M/ ]9 r' G; |8 \4 a5 h

huajie881026

回复 tjbone 的帖子
1 {' H, z& }* Q: J
6 V: T" r$ @, m0 D3 P! |请教包埋前细胞团需要脱水吗？感觉没有脱水的的话，石蜡没有将细胞团很好包住导致切片不好切。

huajie881026

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) v0 f/ y: ]! \8 H4 ?2 e: V
  C6 B! ^: V7 g2 }. X5 r( t+ s9 s嗯  受教了。。。非常感谢！

huajie881026

回复 tutufei 的帖子
6 t5 D7 ]/ B9 q- t# h2 S* r) ]" I3 m0 _$ t4 ^. P8 X
可能细胞状态不好导致团块长得慢* K( j% M' ]* T  u6 P+ e$ I
石蜡切片我也做的不是很好，可以试试冰冻切片

huajie881026

回复 ytumuyangren 的帖子
: o8 q, \6 `7 Y5 _8 m
0 {8 L; o2 L. B4 K" U是的

huajie881026

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: t' [/ i3 ^; x* K8 z1 _7 l
5 U& l$ t7 k7 C4 Q8 B( E细胞状态是否良好？形成pellet所需要的细胞量是否足够？

huajie881026

回复 ytumuyangren 的帖子% a) Y; R" E$ d7 O9 p6 B2 f/ @

: @( {7 a* K/ D7 R% d+ j1 c嗯 我也是这么做的  每次换液的时候要小心诱导基不要影响到pellet1 f& J. ?% ^1 x0 o; V5 b
你要不再试试

huajie881026

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, t% e% N) u1 D7 ^7 K; r
# z, r: |5 ?' F' g: H$ y2 Z& u一般pellet不会扶起来吧，形成球形后有软骨的乳白色的感觉，一般轻易不会散开，你再试试吧
$ B. Z/ i& G/ O/ e4 zPS：离心后三天不要去动它，三天后换液的时候基本感觉的到了