成软骨诱导阿利新蓝染色

huajie881026

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前些日子自己试着做了成软骨诱导分化，5天左右细胞成一团，随着时间慢慢变大，诱导至满28天，细胞团直径约达2mm，团块较白，感觉上是诱导成功了。昨天石蜡包埋，然后切片、脱蜡、脱水后，阿利新蓝染色30min后，拍了照片（如下图），一些疑惑请教做过成软骨诱导的大侠：! U0 s. h+ T9 |: }5 ^
1、切片是不是厚了？昨天切的时候设置的是5um，但切下来的时候感觉厚了，有些地方有重叠；
) P- |% o8 c  ?/ T8 M+ n2、阿利新蓝染的是粘多糖，应该是在外周部分还是中间部分？3 s4 v: [) B9 G1 L6 e. l1 V
100×
& d' _' v0 F- x2 n% l/ q3 s) _& J! j8 L3 ?; ^, ]
200×% p* ]: N$ f  Y6 Q( ^

tjbone

阿利新蓝染可以染软骨基质，但不知你用的是标准阿利新蓝染PH2.5还是PH4.5，PH值不同染的酸性物质不同。
- b. z2 k1 z/ M3 Z软骨含有硫酸软骨素，同时在软骨基质中含有氨基聚糖，也可以用翻红O或甲苯氨蓝染色。

huajie881026

回复 tjbone 的帖子7 T# z3 y. |/ q( R
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请教包埋前细胞团需要脱水吗？感觉没有脱水的的话，石蜡没有将细胞团很好包住导致切片不好切。

tjbone

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6 q3 I& ]  F' A  q+ B+ L/ o一定要按要求先固定，再由低浓度酒精开始到高浓度脱水，二甲苯透明、浸蜡、包埋才行！！！

huajie881026

回复 tjbone 的帖子6 Q9 ?9 r$ {: a) I% F8 g
' G8 B" X, h+ ]# X( ?
嗯  受教了。。。非常感谢！

tutufei

回复 huajie881026 的帖子' i2 n+ x1 \* L2 ]6 _- G- s
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请问你诱导的软骨团长得快吗，这么小的软骨怎么做石蜡切片啊？我诱导的不怎么长啊，形成的圆球，直径才1mm多

huajie881026

回复 tutufei 的帖子- K2 E; c6 {' N0 i7 m' P: V* v9 Q
( @% r6 F: M+ r
可能细胞状态不好导致团块长得慢
7 C8 w6 \8 M2 {5 h石蜡切片我也做的不是很好，可以试试冰冻切片

tutufei

楼主，你这个图是染完色直接拍的是吗？还没脱水透明封片吧？有用甲苯胺蓝染过吗？

644414915

细胞爬片用的是什么包被的玻片 是赖氨酸吗还是明胶啊？

细胞海洋

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/ g$ r) `2 O) T1 l+ b+ w% X! z否则他会看不到, u* A" G+ k; L. h& [5 T8 [