成软骨诱导阿利新蓝染色

huajie881026

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前些日子自己试着做了成软骨诱导分化，5天左右细胞成一团，随着时间慢慢变大，诱导至满28天，细胞团直径约达2mm，团块较白，感觉上是诱导成功了。昨天石蜡包埋，然后切片、脱蜡、脱水后，阿利新蓝染色30min后，拍了照片（如下图），一些疑惑请教做过成软骨诱导的大侠：% S7 C  Z  N8 E: u8 W6 J% U  A
1、切片是不是厚了？昨天切的时候设置的是5um，但切下来的时候感觉厚了，有些地方有重叠；2 X) @8 d4 @7 T- d- W, m
2、阿利新蓝染的是粘多糖，应该是在外周部分还是中间部分？
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huajie881026

回复 tjbone 的帖子
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请教包埋前细胞团需要脱水吗？感觉没有脱水的的话，石蜡没有将细胞团很好包住导致切片不好切。

huajie881026

回复 tjbone 的帖子. |' T6 K$ Q& d$ L* f, U

5 e# D, q0 I4 z3 o, r: P' ^  R嗯  受教了。。。非常感谢！

huajie881026

回复 tutufei 的帖子
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9 A0 [/ B' S: x/ W* F6 Y+ ~+ f& `可能细胞状态不好导致团块长得慢0 O9 w# I! g' h6 `/ ^8 W
石蜡切片我也做的不是很好，可以试试冰冻切片

huajie881026

回复 ytumuyangren 的帖子2 b# v/ U* f2 W+ i" D  C7 T1 }

5 |" K2 Z3 i, S: N/ V' v是的

huajie881026

回复 ytumuyangren 的帖子
8 R8 }) q  R* s& n8 M( Q6 l8 b5 ^' ?4 X0 V) N$ c  C5 o9 Y
细胞状态是否良好？形成pellet所需要的细胞量是否足够？

huajie881026

回复 ytumuyangren 的帖子  s+ N; _$ A3 s) u8 K4 _* O& x

! Z7 Z2 q+ M. o% |嗯 我也是这么做的  每次换液的时候要小心诱导基不要影响到pellet
6 O. N" M6 ]$ V+ `& U' x2 b你要不再试试

huajie881026

回复 ytumuyangren 的帖子
' [  C8 _# b7 ?; g7 z: [) @6 }9 S) q
+ q- `% n8 R, p1 v2 I一般pellet不会扶起来吧，形成球形后有软骨的乳白色的感觉，一般轻易不会散开，你再试试吧
1 s# O# p0 \, V& E/ _/ \PS：离心后三天不要去动它，三天后换液的时候基本感觉的到了