成软骨诱导阿利新蓝染色

huajie881026

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/ a6 L! E! P) S. P/ A2 d前些日子自己试着做了成软骨诱导分化，5天左右细胞成一团，随着时间慢慢变大，诱导至满28天，细胞团直径约达2mm，团块较白，感觉上是诱导成功了。昨天石蜡包埋，然后切片、脱蜡、脱水后，阿利新蓝染色30min后，拍了照片（如下图），一些疑惑请教做过成软骨诱导的大侠：; m+ \7 [  E: U% u- K
1、切片是不是厚了？昨天切的时候设置的是5um，但切下来的时候感觉厚了，有些地方有重叠；
- s0 R/ C- w/ Q) r) ]/ z1 f% q* O2、阿利新蓝染的是粘多糖，应该是在外周部分还是中间部分？
7 y) h6 u# k6 P/ O3 J4 N100×
1 t0 I! K6 V2 P2 B, r1 A4 Q9 B* ^7 G- I5 K
200×; r0 E1 D, E: l  ~2 R6 O3 `, Q

huajie881026

回复 tjbone 的帖子
; s' O4 d0 A) L  F1 Y1 Z) j% q) I. {2 h( I8 Y
请教包埋前细胞团需要脱水吗？感觉没有脱水的的话，石蜡没有将细胞团很好包住导致切片不好切。

huajie881026

回复 tjbone 的帖子
; z5 G4 K( q5 g7 g+ {3 Y2 ^( T+ P
! y3 n2 [  A% ]5 l8 {/ g嗯  受教了。。。非常感谢！

huajie881026

回复 tutufei 的帖子
6 V7 l, |4 w' C, ~% M$ Q
6 T1 c% Z( R+ N* n5 d& B8 f可能细胞状态不好导致团块长得慢( R) n+ G7 B$ F4 a+ |2 x
石蜡切片我也做的不是很好，可以试试冰冻切片

huajie881026

回复 ytumuyangren 的帖子
3 F# a0 R2 ~1 g8 @% Z( F& v% K! W$ K( F1 s: y1 w; l2 b( i' i" s) D
是的

huajie881026

回复 ytumuyangren 的帖子( K( J1 b0 }9 \) S0 {

1 v5 o( @! w- ]# r6 ^4 \细胞状态是否良好？形成pellet所需要的细胞量是否足够？

huajie881026

回复 ytumuyangren 的帖子) i/ X, h4 U6 w  W% X$ s2 e$ q

- Z! @" _  }% k6 i4 v嗯 我也是这么做的  每次换液的时候要小心诱导基不要影响到pellet9 x1 \7 b5 k0 s( m, ~" K$ Y
你要不再试试

huajie881026

回复 ytumuyangren 的帖子
; A1 b. z: Q, ?3 T0 h! W
/ D7 L& c  s- L7 F6 s$ {一般pellet不会扶起来吧，形成球形后有软骨的乳白色的感觉，一般轻易不会散开，你再试试吧
. M' R! V7 Y- Q" Q* m5 x- aPS：离心后三天不要去动它，三天后换液的时候基本感觉的到了