逆转录病毒包装

huangcong1988

前面做逆转录包装，看到文献中报道，以及别人的经验是目的基因：Gag/pol：VSVG的比例为10:9:1，还有一种比例是8:4:1，我不确定哪种更好，因为有人说VSVG对于293T细胞毒性很大，所以，大都倾向于用前一种，但是，我摸条件发现，三种质粒共转293T的时候，比例为8:4:1的时候荧光最强，那是否这个比例是最好的呢？

akxiaoqiang

回复 huangcong1988 的帖子* g4 [. Y% u/ x! k/ d* q# _" h: n

3 w- @9 N. E1 ^- X以前做过，不过用的是platE细胞去包病毒，用HBS和CaCl2，效率有80%-90%。

huangcong1988

回复 akxiaoqiang 的帖子
6 r+ `* @& z3 m- X+ i8 d$ v: u" A' O2 `* j3 U
plat-e的话就不需要包装质粒了，直接转目的基因就Ok了，我这个需要三个质粒比例比较好。还有就是plat-e这个细胞哪里买的？

huangcong1988

回复 akxiaoqiang 的帖子% T/ I1 }( Z& i0 q& @
9 r4 |) c3 Q, v$ L8 h+ P; v
我之前一直在找这个细胞，找了好多地方，有的是没有，有的太贵了

akxiaoqiang

回复 huangcong1988 的帖子: Q( T$ Z9 N  R1 `
. a7 ?! x& x, n7 S) f: V( d
是的，用这个细胞就不需要包装质粒，直接转。一些科研院校都会有的，问问呗

huangcong1988

回复 akxiaoqiang 的帖子8 O: m5 s& H+ o9 c4 O! P) [

7 p. S& ]+ v; |: n4 Z  _# s5 i( S想问一下，您这个plat-e是哪里买的

Jonathan

回复 akxiaoqiang 的帖子3 P+ d+ K: M) }$ o& V
9 l5 r( F$ }7 y; g9 M
plate-E一般用于包装鼠ips用的病毒，人一般都要用293T，然后要多加入一个包装质粒

zhangtcm

回复 Jonathan 的帖子
3 |* K$ W" {: k3 N5 }5 t" m7 B$ n9 @7 g4 b) Z6 d5 t! N
Generation of Human induced Pluripotent Stem Cells$ s2 t1 y' {9 N: w- U  [1 ^
Center for iPS Cell Research and Application (CiRA): \. A# V0 z. K6 a! f
Institute for Integrated Cell-Material Sciences (iCeMS)
$ f( |* A- V- k5 b% jKyoto University
0 J4 B- E; @; E5 M# t这篇文献是用plate-E来包装人ips用的病毒的，这篇文献也蛮经典的

zhangtcm

回复 huangcong1988 的帖子
- D! m4 R8 d7 m: ^/ t& [3 `  G1 A  z2 S
哈哈，plat-e哪儿有便宜买的，有消息了通知一下

Jonathan

回复 zhangtcm 的帖子7 Y/ {4 b; {& t) u! h

, }$ T" P/ W6 \" l1 T2 ^我们在GIBH的时候都是用293T。plate-E是用来包装鼠ips病毒的。当然也可以用来包装人的，只是效率低。据说是这个原因。你还可以用293FT，其实都差不多。呵呵。你可以去GIBH那边要一管