逆转录病毒包装

huangcong1988

前面做逆转录包装，看到文献中报道，以及别人的经验是目的基因：Gag/pol：VSVG的比例为10:9:1，还有一种比例是8:4:1，我不确定哪种更好，因为有人说VSVG对于293T细胞毒性很大，所以，大都倾向于用前一种，但是，我摸条件发现，三种质粒共转293T的时候，比例为8:4:1的时候荧光最强，那是否这个比例是最好的呢？

akxiaoqiang

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0 o4 Q. B+ [1 b/ k以前做过，不过用的是platE细胞去包病毒，用HBS和CaCl2，效率有80%-90%。

huangcong1988

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plat-e的话就不需要包装质粒了，直接转目的基因就Ok了，我这个需要三个质粒比例比较好。还有就是plat-e这个细胞哪里买的？

huangcong1988

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3 Y7 R# Z  J) i# u
  ~4 Y8 ?  {" q" c8 p0 k我之前一直在找这个细胞，找了好多地方，有的是没有，有的太贵了

akxiaoqiang

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0 G$ l; i5 i. F0 f; |0 L) A
, N  H, Y5 ^5 a! G是的，用这个细胞就不需要包装质粒，直接转。一些科研院校都会有的，问问呗

huangcong1988

回复 akxiaoqiang 的帖子, s8 J% {* p  W: X8 H
+ W) [: G" F4 \4 N4 t1 `3 r
想问一下，您这个plat-e是哪里买的

Jonathan

回复 akxiaoqiang 的帖子7 }8 e2 T3 s* L" t! @- f: N
1 k; o5 V* I" b# V6 X( Y
plate-E一般用于包装鼠ips用的病毒，人一般都要用293T，然后要多加入一个包装质粒

zhangtcm

回复 Jonathan 的帖子4 F" V8 `8 \' h6 x
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Generation of Human induced Pluripotent Stem Cells
  n! _- g% t! k( ~" C8 uCenter for iPS Cell Research and Application (CiRA)
& y( n6 |: ~; b6 a  T- f4 O# RInstitute for Integrated Cell-Material Sciences (iCeMS)
) g% k( c" f" F2 i$ pKyoto University2 v  G! R$ ~: u+ t: u
这篇文献是用plate-E来包装人ips用的病毒的，这篇文献也蛮经典的

zhangtcm

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3 a4 W+ f) x% M2 ]" K. x# f5 k- N. c% M
哈哈，plat-e哪儿有便宜买的，有消息了通知一下

Jonathan

回复 zhangtcm 的帖子3 x/ Y. W0 m2 F
; v5 b# L. e  D+ z$ o# K% `
我们在GIBH的时候都是用293T。plate-E是用来包装鼠ips病毒的。当然也可以用来包装人的，只是效率低。据说是这个原因。你还可以用293FT，其实都差不多。呵呵。你可以去GIBH那边要一管