传代后细胞这样怎么办？

fay898

人骨髓间充质干细胞，第一次传代已经7天了，细胞长的很奇怪，求解！！！
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里面大大圆圆的是什么啊？？？是MSC么？细胞还要留着么？！) w, U( ^/ `, g  q0 K: c
望各位指教哈！！

cherrysung

这是原代细胞第一次传代？什么来源？

孙帅帅

里边圆圆的肯定不是间充质干细胞，间充质干细胞是成纤维状贴壁细胞，胰酶消化后看到的才是圆形的细胞。原代培养的怎么样？你是用什么方法处理的脐带啊？是不是支原体污染？

猩猩

你在传代后有换液么？？？你在移动培养皿的时候，圆点是否也移动？？你确定圆点是贴壁生长了么？？若没有贴壁的尝试下用培养液冲洗掉

yinfuhua

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原代生长如何？现在细胞的状态不好，感觉再培养下去也没什么意义了。骨髓间充质干细胞原代培养时生长较为缓慢，传代后生长会快些。传代时要注意细胞密度（照片上看你的密度太低了），3d左右即要根据情况换液，注意无菌操作，保持良好的生长环境，细胞才能长好。

fay898

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对的，是第一次传代。人骨髓间充干~

fay898

回复 孙帅帅 的帖子
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我用的人骨髓，Ficoll分离后直接培养。培养液中有1%的双抗。原代MSC簇有点老化，养了20天才传第一代~~~纠结了~~~

fay898

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这是刚刚全量换液后的照片。细胞传代后已经换了1次液了，这是第2次换液。移动培养皿时，原点不动的~~没敢冲洗~~下次换液我试试~~

fay898

回复 yinfuhua 的帖子3 a1 _! v! u8 `' S' [9 Z

0 [1 D! f. t& _4 X谢谢您！原代接种了2皿，长的比较慢，虽有MSC簇，但比较少；22天第一次传代，细胞很少，细胞簇中间有点老化；2:1传至10cm皿，已经换液2次。麻烦请教下，初次接种密度多少为宜？！

yinfuhua

回复 fay898 的帖子4 [! |! L# z1 k% S/ K
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不客气。一般初次接种密度大约在2-3X10^6次方。你原代培养时间过长，所以老化严重。如果看细胞数量不多，甚至可以1:1传下代，然后继续培养、换液。再根据细胞生长状况决定下一步的传代。你试下看看，这样会好些的。