免疫磁珠筛选细胞后不贴壁

希望之光

大家好，最近尝试做了MACS，用的是间标的，但是做完之后细胞不贴壁。请问大家谁做过间标的，指点一下喽！
4 m, h3 P3 u: M; B3 a我大概的流程是细胞消化后过滤成单细胞悬液，1%BSA，37°C半小时，一抗孵育1小时（37°C），接下来就是说明书上的操作，二抗是4°冰箱15min其他都是严格按照说明书走的。磁珠是德国美天旎的。谢谢大家

我爱火热的冬天

你是做的什么动物的sscs，用的什么抗体，有没有用台盼蓝检进行死活检测，不贴壁是指无饲养层的情况还是有饲养层？如果没有饲养层本身的贴壁能力是较弱的。

芦苇浅

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. }2 S9 |' ?9 K5 [同问：在进行免疫磁珠筛选过程中要求使用的Buffer（含0.5%BSA和2mMEDTA的PBS）是预冷的，并且在常温环境中进行长时间的过柱操作，那么细胞在长时间的低温环境下活力肯定会减弱，是不是有什么好的方法，能够减少细胞损伤呢？

我爱火热的冬天

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细胞相对是能够忍受低温的，尤其是4度，对细胞的损伤还是比较小的，而且孵育过程必须低温，这个是没办法的，倒是在消化过程中对细胞的损伤较为严重

希望之光

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$ w6 E. o* b- A" n  M: R! V我养的是间充质干细胞，CD29抗体，我的细胞活力很好就没活检，这个细胞不用饲养层就可以养的

芦苇浅

回复 希望之光 的帖子6 H7 b+ G) Q. ~/ {) {' ?4 Z. T

' m5 E3 t+ q% ?% ~# M* B那么你从开始消化细胞到最后筛选完成一共需要多长时间呢？

希望之光

回复 芦苇浅 的帖子4 g$ ?5 i2 t; |& d
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