免疫磁珠筛选细胞后不贴壁

希望之光

大家好，最近尝试做了MACS，用的是间标的，但是做完之后细胞不贴壁。请问大家谁做过间标的，指点一下喽！: d* O4 a; ?; x. h  {$ Z2 s! ~
我大概的流程是细胞消化后过滤成单细胞悬液，1%BSA，37°C半小时，一抗孵育1小时（37°C），接下来就是说明书上的操作，二抗是4°冰箱15min其他都是严格按照说明书走的。磁珠是德国美天旎的。谢谢大家

我爱火热的冬天

你是做的什么动物的sscs，用的什么抗体，有没有用台盼蓝检进行死活检测，不贴壁是指无饲养层的情况还是有饲养层？如果没有饲养层本身的贴壁能力是较弱的。

芦苇浅

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1 d: Q5 A$ f$ g2 {
同问：在进行免疫磁珠筛选过程中要求使用的Buffer（含0.5%BSA和2mMEDTA的PBS）是预冷的，并且在常温环境中进行长时间的过柱操作，那么细胞在长时间的低温环境下活力肯定会减弱，是不是有什么好的方法，能够减少细胞损伤呢？

我爱火热的冬天

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3 D) [$ Q: L5 W' u, ~, }  r7 {
# f3 w+ b+ x- e0 u, ~细胞相对是能够忍受低温的，尤其是4度，对细胞的损伤还是比较小的，而且孵育过程必须低温，这个是没办法的，倒是在消化过程中对细胞的损伤较为严重

希望之光

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我养的是间充质干细胞，CD29抗体，我的细胞活力很好就没活检，这个细胞不用饲养层就可以养的

芦苇浅

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6 Z, @. Q( Y1 x! ~% G" s
& J( _0 t0 Q9 f9 W: L) z那么你从开始消化细胞到最后筛选完成一共需要多长时间呢？

希望之光

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