成脂分化问题，拜托各位前辈指点

lgdx1234

各位前辈好，我最近做ASC分化实验，用0.5mM IBMX，1μM Dexamethasone，10μM 胰岛素，200μM indomethacin来进行分化，每三天换液一次，分化三周时间。油红用异丙醇溶解的，用0.22微米过滤器过滤了两次。染色四十五分钟，染完了发现有很多红色块状漂浮物，染色效果也不理想。
# F" P& ^2 F+ J$ [+ a; s细胞用逆转录PCR做过marker检测，该表达的都表达了，分化后的细胞也用逆转录PCR检测了FABP4，也有表达。
9 x8 u% D" a4 m( ]( w; S$ e请各位前辈给予指点。谢谢^^
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lgdx1234

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" y: }6 e6 E& F0 z" O' h' i0 e5 q2 |7 |: |2 k1 x2 a' j
我的固定液是4%的多聚甲醛，固定了10分钟，主要是诱导了很久只有少量细胞出现液滴，所以就持续诱导了很长时间。

lgdx1234

回复 huangcong1988 的帖子/ B. x$ z+ F5 L. M% p! U' |' C/ I- Y
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十分钟没问题，我们实验室都是固定10分钟~

lgdx1234

回复 limeiying 的帖子
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3 H5 m# H  G8 c7 ?7 }液滴不是很明显，但是感觉是有的，很小，有液滴的细胞比例很低。可以确认的是细胞不再分裂了，细胞数目在加入分化培养液后不变了。

lgdx1234

回复 huangcong1988 的帖子) i" S: W0 @6 O' E( Z

- M2 p  W, K7 r) O8 D有的 我加了10%的血清~

lgdx1234

几年后自己来回答自己的问题。脂肪细胞分化诱导时，密度很重要，长满的情况下进行分化时，分化效率比较高。