请问一下，如何确保6孔板中每个孔加50个肿瘤细胞？

cyz3057

如题目所述，现在做细胞，看文献有说要每孔50个细胞，这个换算下来应该每孔加多少ul的单细胞悬浮液呢？

cyz3057

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, ~; h+ J) v9 l6 S" ]4 ]
' N8 v; j/ J& z9 u哦 客气的 以后多交流

仰天

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谢谢，因为没做过生长周期方面的实验，所以对这方面就没注意过。

cyz3057

回复 仰天 的帖子  [5 B! o' A& ~% }5 t8 ]. c" f

, o7 W7 ], |! q4 T哦 我和师姐也交流了一下 基本不考虑每瓶细胞之间的生长状态的差异 我个人觉得 如果做提取rna 蛋白等可以忽略不计 但是做比如分析生长周期等 还是要注意一下 比如采取同一细胞 不同培养瓶 分组去测 细胞的生长周期

仰天

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& ?- A1 G, z# I5 n- a0 }/ o
& f" e6 K) s4 I0 @9 [% c可能是我做的不够严谨，对于同一种细胞如果要几瓶或几皿一块消化，混合起来一块离心的话，我还真没有考虑过不同瓶子或皿中细胞的差异性。如果需要考虑差异性的话，能告诉我为什么吗？谢谢！

cyz3057

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' D) _" K5 W# m" v' t& N. [& w
+ j. p% `2 |- s: w9 ^; D恩恩，好的，昨晚做实验就用了这个方法计数，不过没做好，第一次估计细胞密度，担心细胞密度不够，直接悬浮了四瓶细胞，为了均一性，将四瓶细胞混在一起了，最后又弄的密度很大，又得稀释。请问一下哦，你们做细胞实验，怎样避免每瓶细胞之间的差异性呢，还是忽略不计。谢谢指导。

仰天

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+ P' P3 Y$ R4 b4 B& Y8 w9 r% Y% S) }2 ?; H6 J$ x) p# d
我们细胞计数都是用计数板的，就是一个载玻片和一个盖玻片，显微镜下在载玻片的中央位置是计数位置，该计数位置有四个大正方格，每一个正方格又由小的16个正方格组成。计数的时候盖上盖玻片（盖在计数位置上），吸取10μL的细胞悬液打到载玻片和盖玻片的间隙中，不要有气泡。然后你计数，举个例子你在四个大方格计数是10，20,15,15，那你最终的细胞数是这四个数相加除4，然后乘以10^4，即15X10^4/mL，也就是说你计数的原液中，每mL中含有15X10^4个细胞。然后你再根据你要加的细胞数计算你要吸取的体积。

cyz3057

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哦 谢谢哈 我的细胞昨天看了下 基本能长到70%左右的样子 我不大知道在计数时滴多大体积的细胞悬液 网上都说滴一滴 这样到时怎么能够知道滴了多大的体积 那总的细胞数又怎么知道呢

cyz3057

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; A9 R8 k5 z. |2 s2 e/ _! @9 q/ N4 t7 [
恩恩 thanks

cyz3057

回复 genedu 的帖子3 G& T/ e5 Y: V0 Q. y8 M
0 U6 k: A5 `8 r1 J% A7 @5 V# g& N4 j8 _
哦 不好意思 这几天实验忙的 再请教一下哦 那我现在要计数培养瓶内的细胞数 里面有3ml的培养基 我消化后 离心 用3ml培养基重悬成单细胞悬浮液 取多少体积的细胞悬液用来计数呢