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xiaolong523 发表于 2014-9-25 17:10

Taqman探针法——PCR体系的建立

1、引物、探针的设计：
      探针Tm为68-70℃ ，<30 bp, 5’不能有G，G可能会淬灭荧光素，
       引物尽量靠近探针，扩增片段<400 bp，引物Tm为59-60℃

2、反应参数的确定：
       一般为：94 ℃，10-20S
                        60℃，30-60S（Taq酶5′→3′外切核酸酶活性在60℃ 最高），也可通过温度梯度优化退火温度
                     
3、优化引物和探针浓度：获得最小Ct值，最大信号/背景比值
       引物浓度：50-900nM
       探针浓度：50-250nM

Tlexander 发表于 2014-12-23 18:05

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