关于WB制胶的问题

shaozi402

我刚开始做WB，查了一些相关资料，发现在制胶的过程中有一些问题：( J/ }$ z$ q3 e; f2 ], T; y
分子克隆实验指导书上显示为：水，30%丙烯酰胺溶液，1.5mol/L Tris (PH8.8)，10%SDS，10%过硫酸铵，TEMED,
2 [4 t1 ]* p5 C% S: h7 R可是在beyotime的凝胶配制试剂盒上却显示为水，30%丙烯酰胺溶液，1mol/L Tris (PH8.8)，10%SDS，10%过硫酸铵，TEMED; ]4 n& o7 h3 ]* `, }# w/ Y
为什么Tris的浓度不一致呢5 M7 n3 t7 Y8 r  G1 m! C! r
请教各位老师% H2 O, g3 Q5 c. I* {, H

qingxingruyu

不分浓缩胶和分离胶吗，应该都可以吧，而且试剂盒我觉得是优化后的

shaozi402

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我写的这个是分离胶
' j" U! o1 p; p

moluxingke

一般实验室自己做胶，分离胶用的是1.5M的Tris。看8.8的PH应该是做分离胶用的，对western制胶来说，PH值是很重要的，浓度可能要求没有那么严格，试剂盒应该是一套优化后的体系，应该没有什么大问题。

shaozi402

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哦，我明白，谢谢7 K! h7 j$ B8 T  ]2 N, M

yinchong42

很多时候，一些试剂用量需要灵活控制的实验，在掌握操作的同时也要弄清楚各个组分是干什么的，比如SDS-PAGE，水的作用是稀释，tris作用是调节PH和凝胶渗透压，蔗糖的作用是增大凝胶密度以免上样蛋白沉落，SDS的作用是变性蛋白，丙烯酰胺过硫酸铵的作用是构成凝胶，temed是催化；在了解了各种成分的作用之后，就可以自己设计实验方案，
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" F9 Q' q  Q( D2 t7 |9 t个人建议做western配胶尽量自己配，试剂盒和买来现成的胶大多不如自己配的靠谱

shaozi402

回复 yinchong42 的帖子! Z/ w8 n$ A: ~7 ~* o. @

  b  p5 w# s" \) H+ O# E% w谢谢您，虽然只有三行字，但是句句都中要害。

yinchong42

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# g- M( K7 u3 P0 \+ O
, ]; ^5 A& A+ M7 |不客气，相互学习！

97b1

这个按照分子克隆的来就行了，或者abcam的指南

shaozi402

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好的，谢谢
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