关于WB制胶的问题

shaozi402

我刚开始做WB，查了一些相关资料，发现在制胶的过程中有一些问题：, g3 t0 o( d: h; y6 V& c
分子克隆实验指导书上显示为：水，30%丙烯酰胺溶液，1.5mol/L Tris (PH8.8)，10%SDS，10%过硫酸铵，TEMED,1 U5 w5 v, i* X
可是在beyotime的凝胶配制试剂盒上却显示为水，30%丙烯酰胺溶液，1mol/L Tris (PH8.8)，10%SDS，10%过硫酸铵，TEMED  [7 J) g1 T6 y1 {. l" g
为什么Tris的浓度不一致呢$ m7 X, ^" }% u' }  p4 u- t
请教各位老师
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qingxingruyu

不分浓缩胶和分离胶吗，应该都可以吧，而且试剂盒我觉得是优化后的

shaozi402

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7 g+ {9 F6 Z, A+ \我写的这个是分离胶+ v& ?3 o8 a1 h4 f- [- [- w( N3 X

moluxingke

一般实验室自己做胶，分离胶用的是1.5M的Tris。看8.8的PH应该是做分离胶用的，对western制胶来说，PH值是很重要的，浓度可能要求没有那么严格，试剂盒应该是一套优化后的体系，应该没有什么大问题。

shaozi402

回复 moluxingke 的帖子, g: l, s9 l7 J) T/ g" I# l
2 H. N7 W# C  t* k
哦，我明白，谢谢
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yinchong42

很多时候，一些试剂用量需要灵活控制的实验，在掌握操作的同时也要弄清楚各个组分是干什么的，比如SDS-PAGE，水的作用是稀释，tris作用是调节PH和凝胶渗透压，蔗糖的作用是增大凝胶密度以免上样蛋白沉落，SDS的作用是变性蛋白，丙烯酰胺过硫酸铵的作用是构成凝胶，temed是催化；在了解了各种成分的作用之后，就可以自己设计实验方案，2 ~8 X1 ^+ Y9 B: u( {  j$ d9 I' A

6 `# t. ?4 v2 J& C5 F个人建议做western配胶尽量自己配，试剂盒和买来现成的胶大多不如自己配的靠谱

shaozi402

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谢谢您，虽然只有三行字，但是句句都中要害。

yinchong42

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不客气，相互学习！

97b1

这个按照分子克隆的来就行了，或者abcam的指南

shaozi402

回复 97b1 的帖子- O' M" @$ o8 l$ }: G

4 u) ?3 d& Z' {- ?" ?% Z  N好的，谢谢
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