关于WB制胶的问题

shaozi402

我刚开始做WB，查了一些相关资料，发现在制胶的过程中有一些问题：
- ~) H( Q/ ]7 p分子克隆实验指导书上显示为：水，30%丙烯酰胺溶液，1.5mol/L Tris (PH8.8)，10%SDS，10%过硫酸铵，TEMED,- [1 r- R7 r  x% e. T7 q
可是在beyotime的凝胶配制试剂盒上却显示为水，30%丙烯酰胺溶液，1mol/L Tris (PH8.8)，10%SDS，10%过硫酸铵，TEMED
4 Z2 S% M$ F0 g! j. A& V为什么Tris的浓度不一致呢2 ]; R* a* i. s
请教各位老师) H( f* W" R1 c

qingxingruyu

不分浓缩胶和分离胶吗，应该都可以吧，而且试剂盒我觉得是优化后的

shaozi402

回复 qingxingruyu 的帖子" d4 o# C0 q$ N( ?4 @" n
$ U& w: `6 m8 p  S! ?$ j5 M
我写的这个是分离胶0 d3 ?1 E7 p: J

moluxingke

一般实验室自己做胶，分离胶用的是1.5M的Tris。看8.8的PH应该是做分离胶用的，对western制胶来说，PH值是很重要的，浓度可能要求没有那么严格，试剂盒应该是一套优化后的体系，应该没有什么大问题。

shaozi402

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- T( l9 W) J5 D  R: j. t( |% V哦，我明白，谢谢, u& `: V! n4 s! ?& N8 o) v

yinchong42

很多时候，一些试剂用量需要灵活控制的实验，在掌握操作的同时也要弄清楚各个组分是干什么的，比如SDS-PAGE，水的作用是稀释，tris作用是调节PH和凝胶渗透压，蔗糖的作用是增大凝胶密度以免上样蛋白沉落，SDS的作用是变性蛋白，丙烯酰胺过硫酸铵的作用是构成凝胶，temed是催化；在了解了各种成分的作用之后，就可以自己设计实验方案，0 m' \1 ~' x& q0 Z. A
( U+ ]2 P! _* R2 m6 V* A
个人建议做western配胶尽量自己配，试剂盒和买来现成的胶大多不如自己配的靠谱

shaozi402

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% R' r& p# W. g7 x* P
谢谢您，虽然只有三行字，但是句句都中要害。

yinchong42

回复 shaozi402 的帖子2 X2 \+ J  O0 u# V* X

. R6 d& p9 I8 T3 |. a不客气，相互学习！

97b1

这个按照分子克隆的来就行了，或者abcam的指南

shaozi402

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好的，谢谢- l) G9 f7 Z: w