关于WB制胶的问题

生命之轻

我觉得你这里 虽然分子克隆是1.5mol/L Tris (PH8.8)  试剂盒是1mol/L Tris (PH8.8)，但由于分子克隆还加了水稀释了，它们最后Tris的浓度应该是一样的。

shaozi402

回复 生命之轻 的帖子4 b* M/ @+ O9 }7 z6 I# y3 V# n/ |

5 g/ W3 M3 `5 @7 p9 Z是要加水，加水之后Trish的浓度是稀释了，但是其他成分的浓度应该也被稀释了吧，

shaozi402

回复 生命之轻 的帖子8 T. V- w$ p1 U

5 Y% W7 W) T' h! Q4 [8 W是要加水，加水之后Trish的浓度是稀释了，但是其他成分的浓度应该也被稀释了吧，

晴斗斗

配方中Tris-Hcl的作用：
, Z' ~$ n1 _+ u6 q上层的浓缩胶用的是Tris-HCL缓冲液，PH6.8，HCL的解离度大，几乎全部成CL-，CL-在电场中移动最快。而电泳槽中含有甘氨酸，在PH6.8时只有少量解离，在电场中移动的最慢。蛋白质（被夹在中间）就在由快慢离子形成的电位梯度中被浓缩了。下层的分离胶用的是Tris-Hcl缓冲液，PH8.8，在此PH下，甘氨酸解离度增大，泳动速度增加并超过了蛋白质，原先的电位梯度消失，大小形状不同的蛋白质在电场中分离。

shaozi402

明白了分离胶和浓缩胶的本质区别，谢谢！; W8 U! Q- f7 N/ }# ?( C6 F

妖妖空

实验室应该有一个配胶的表吧，里面写了各种体积中各种组分的体积嘛，这些细节就不要纠结了。不过对于WB来说，配胶和转膜是最重要的操作，基本上决定了你最后的结果的好坏。这个多体会体会，有些人都做到博士毕业了。WB跑胶还是压不齐。

shaozi402

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1 B# ?( _6 [1 C% b3 I
+ L+ u+ h; B' h8 D) t谢谢了

thetenstar

Tris的浓度不是最重要的，PH最重要！现在一般都是1.5的，也有少部分1.0的，你用那种就用那种的配方就好了！一般没什么问题！

shaozi402

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好的，谢谢
/ w8 x( e* d, x# E, T3 a

naturehu

tris的主要作用是稳定pH和渗透压调节，虽然浓度不一样但是可能不同浓度tris的添加量也有差别吧。