关于WB制胶的问题

shaozi402

我刚开始做WB，查了一些相关资料，发现在制胶的过程中有一些问题：) I% l  y: H5 U1 `4 K5 R+ s" _
分子克隆实验指导书上显示为：水，30%丙烯酰胺溶液，1.5mol/L Tris (PH8.8)，10%SDS，10%过硫酸铵，TEMED,+ L3 h; a+ ~# `- l1 _
可是在beyotime的凝胶配制试剂盒上却显示为水，30%丙烯酰胺溶液，1mol/L Tris (PH8.8)，10%SDS，10%过硫酸铵，TEMED% L& p$ z4 j: s$ \" A$ e7 Y
为什么Tris的浓度不一致呢
1 W5 V* q6 }* h6 _0 N8 y% U: [3 X1 H请教各位老师8 I; F5 e4 W, X6 y

naturehu

tris的主要作用是稳定pH和渗透压调节，虽然浓度不一样但是可能不同浓度tris的添加量也有差别吧。

shaozi402

回复 thetenstar 的帖子$ U) M1 Q( L! v/ |1 H# Z3 B
1 {2 A  ?/ R. q4 j- A2 w
好的，谢谢; ^  D! Y3 k" V$ @% B( I- h& _

thetenstar

Tris的浓度不是最重要的，PH最重要！现在一般都是1.5的，也有少部分1.0的，你用那种就用那种的配方就好了！一般没什么问题！

shaozi402

回复 妖妖空 的帖子2 X8 D  C8 w( _- J0 a3 h' ?/ U3 X
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谢谢了

妖妖空

实验室应该有一个配胶的表吧，里面写了各种体积中各种组分的体积嘛，这些细节就不要纠结了。不过对于WB来说，配胶和转膜是最重要的操作，基本上决定了你最后的结果的好坏。这个多体会体会，有些人都做到博士毕业了。WB跑胶还是压不齐。

shaozi402

明白了分离胶和浓缩胶的本质区别，谢谢！
6 S: H/ `+ E2 }

晴斗斗

配方中Tris-Hcl的作用：0 _; t0 q0 Y$ L, i' q, Y1 ]9 R
上层的浓缩胶用的是Tris-HCL缓冲液，PH6.8，HCL的解离度大，几乎全部成CL-，CL-在电场中移动最快。而电泳槽中含有甘氨酸，在PH6.8时只有少量解离，在电场中移动的最慢。蛋白质（被夹在中间）就在由快慢离子形成的电位梯度中被浓缩了。下层的分离胶用的是Tris-Hcl缓冲液，PH8.8，在此PH下，甘氨酸解离度增大，泳动速度增加并超过了蛋白质，原先的电位梯度消失，大小形状不同的蛋白质在电场中分离。

shaozi402

回复 生命之轻 的帖子9 }4 g! m* S& R5 c1 L% r6 l8 o
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是要加水，加水之后Trish的浓度是稀释了，但是其他成分的浓度应该也被稀释了吧，

shaozi402

回复 生命之轻 的帖子- }) i' s2 J, ]5 \
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是要加水，加水之后Trish的浓度是稀释了，但是其他成分的浓度应该也被稀释了吧，