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关于流式分析时的对照设置找到参考答案了，与大家分享交流，仅供参考！* e+ h- T% Z+ m& p
流式细胞术分析免疫表型必须设置各种对照(ｃｏｎｔｒｏｌｓ),包括阳性对照(ｐｏｓｉｔｉｖｅｃｎｔｒｏｌ)、阴性对照(ｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌ)、正常对照(ｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌ)、同型对照(ｉｓｏｔｙｐｅｃｏｎｔｒｏｌ)、空白对照(ｂｌａｎｋｃｏｎｔｒｏｌ)等。对照的目的是避免各种因素可能造成的假阳性或假阴性反应。1 阳性对照:是检查已知阳性标本能否用所测条件与方法确定为阳性,如ＣＤ3的ＭｏＡｂ检测正常人血液Ｔ淋巴细胞的阳性率一般应大于60%以上,若明显低于此值,则有可能是ＭｏＡｂ的质量与浓度、荧光染色条件、流式细胞仪的状况等存在问题。阳性对照达不到要求时不能进行临床试验。2 同型对照:是指与ＭｏＡｂ相同的、未免疫小鼠的免疫球蛋白亚类,若使用直接免疫荧光染色法,同型对照也应标记荧光色素,如ＩｇＧ1 ＦＩＴＣ、ＩｇＧ2ａ ＰＥ等。主要考虑了细胞的自发荧光、ＦＣ受体介导的抗体结合和非特异性抗体结合等影响因素。此外,同型对照与ＭｏＡｂ所标记的荧光色素、浓度、Ｆ:Ｐ比值(标记的荧光色素与免疫球蛋白分子的比值)应该相同为最佳,这对准确设定阴性与阳性细胞的界标有重要意义,切忌使用与ＭｏＡｂ不相匹配的同型对照,最好为同一实验室、采用相同工艺或方法制备(如同一品牌)的产品。3 空白对照:仅以缓冲溶液,如ＰＢＳ、ＨＥＰＥＳ缓冲液等替代ＭｏＡｂ进行试验,其余条件与阳性或同型对照相同。空白对照主要用于观察细胞和缓冲液中所含物质的自发荧光。由于一般标本细胞的自发荧光极弱,又已做同型对照,免疫表型分析时可以免做空白对照。4 正常对照:用健康人、近期无感染、未使用任何药物的标本(如血液)作为对照。对一种新的ＭｏＡｂ(如ＣＤ19 ＦＩＴＣ),在使用前进行对照试验,可了解其性质、效价等特性是否符合实验要求。在临床试验时,为了避免一些不定因素可能造成对实验结果的的影响,以及与患者测定结果比较,常常需要正常对照。例如,正常对照血小板ＣＤ41阳性百分比应至少>95%以上,平均荧光强度(ＭＦＩ)比同型对照强5～10倍以上,若正常对照出现异常结果,则不能出实验报告。5 阴性对照:是指用已知不表达某种抗原的细胞作为样本检测,应出现阴性结果的对照试验。阴性对照试验可以避免ＭｏＡｂ的纯度不够或特异性差等因素造成的假阳性结果。如血小板无力症(Ｉ型)患者,由于其血小板缺乏ＣＤ41和ＣＤ61,可作为最好的阴性对照。测定血小板膜ＣＤ41时,方法同正常对照,只是将正常人血液替换为血小板无力症患者,血小板无力症Ｉ型患者血小板膜ＣＤ41阳性血小板百分比一般<5%。6 自身对照:待测标本为混合细胞(如血液或骨髓)时,若检测其中一种细胞的免疫表型,则其他细胞可作为对照。例如,测定外周血中白血病细胞的髓过氧化物酶(ＭＰＯ),白血病细胞为阴性,成熟中性粒细胞应呈阳性(阳性对照),成熟淋巴细胞为阴性(阴性对照),可以准确地判断白血病细胞ＭＰＯ为阴性。此种自身对照可能比外加阴性对照或阳性对照更可靠,尤其是在细胞内抗原分析时更是如此。 |
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发表于 2009-3-26 21:50
发表于 2009-4-2 21:18
