这次的CIK表型有点离谱，求大神解惑

baby00000003

先上图，4 W2 N0 e1 G+ X) r; m2 Z9 p* B

  l9 D& A' b) E; G2 q& }" D2 m3 B! [7 f& J2 R; K5 {* ~
这是培养至D4的外周血CIK4 a' x% [. @/ O& j' j
不同以往的是CD3阳性率很低（图中的FITC）但是CD56阳性率相对较高（图中的PE）( T+ i4 Y3 a3 S1 l0 c: Y, r7 u

, r! g* }3 _0 X; l; qD0刚刚分离PBMC时的表型检测，CD3阳性率已经是50%左右，也就是说随着培养CD3的阳性率反而降低了
* k6 Z( [0 H5 T- g6 u2 ~. n$ E" V6 o: e. J3 v) [
CD56单阳性的会是什么细胞呢？
) J, K# Q9 @6 E0 fNK？. \+ \) D0 g6 V+ I3 X& \# {
但是培养体系中没有加入IL-15不会有什么让NK增殖的东西吧？
5 o! Z& `1 e! t! X
) u' Y# l6 u, D9 }画门时隐约可以画出2个门，其中细胞数较少的P2倒是CD3阳性率靠谱，P1中猜测含有2种细胞，一种是CD3+/CD56-，另一种CD3-/CD56+，也像是不成熟的CIK和NK....... B+ Y4 Y6 x" t

& P8 t5 ~, F, ]求大神们解惑，感激不尽~

暖羊羊

回复 hyg5481655 的帖子0 }/ W! T# h/ W$ X$ n  F

! F! I; u' h1 m$ I! Y就加一次，后面培养过程中根据CIK细胞数量进行补液，补的培养基中添加了IL-2因子。

hyg5481655

回复 暖羊羊 的帖子
7 h* s" w. N, y- M8 i: S* D6 [+ O8 c+ Z/ P, J$ q5 V# }
老师您好，您加CD3单抗是只加一次还是一直加着？作用时间有几天？

hsu86

建议到13天是时候再测流式，第四天细胞还没刺激起来，时间太早了! `8 k# B& N. S' S& A1 V4 i
我也有过把CIK细胞养成NK的情况，有次做完流式一看80%CD16CD56，不相信又去了一次样，还是一样的结果，太神奇了，具体原因也不清楚

baby00000003

回复 暖羊羊 的帖子5 `% P  n4 j' V; z
  e& E1 T2 d. R) z# p5 I0 Z0 K
左边那个图是isotype，4 M! b- `$ R# ^- t# \1 M  {
当然加过OKT3，不然CIK长的少嘛~今天是D7，CD3+已经上来了，姑且猜测是个体差异吧,或者是实验时加错抗体了-_-......
& b( i4 j; P9 d4 QD0的图没有贴上来....

张钰0206

细胞的存活率测了吗？NK细胞还需要测一个CD19才能确认吧。流式最先开始电压调了吗？还要做一个阴性对照，结果才可靠。

暖羊羊

楼主，我想问你培养CIK的时候加CD3单抗了吗？我们前期做过几次实验，以没有加CD3单抗为对照组的，分别在6d、14d进行流式检测，发现对照组CD3-CD56+细胞比较高，CD3+CD8+、CD3+CD4+比率都很低（应该大部分是NK细胞），扩增倍数也很低；实验组加入CD3单抗，CD3+一直处于95%以上，CD3+CD8+也明显升高。& R9 r. i3 g/ G  Q
CIK是一群异质细胞，包括CTL（CD3+CD8+）、NK（CD3-CD56+）和Th1（CD3+CD4+），杀伤活性也是这几类细胞共同作用的结果。
' w4 h% Z7 |) t4 X8 z另外，左边那个图是第0天的吗？我从流式图上没看出来刚分离的PBMC的CD3+表达率达到50%以上呀？

孙帅帅

D4 CIK细胞还不成熟~   等几天再做吧！

baby00000003

回复 cjsbaicai 的帖子* V( x6 ?7 g" G

5 Q( v2 R. [' z: R那个图就是说有一群为数不少的CD3-/CD56+呢......+ g3 \& g5 ]1 d# W
当然至今我也只做过5个样本，这种情况还是第一次......
9 f/ y2 a( ^2 O3 n; e, a1 m如前辈所说，且养着它看吧~

cjsbaicai

第四天时间太短，多培养几天看下。另外，CD56一个指标说明不了什么，判定NK细胞的标准时CD3-CD56+，这个你可以把横纵坐标修改下看看。此外你这分离培养的细胞云图太散，而且还分为两群，可以从源头找找原因看