求教DC细胞培养问题，非常感谢

神经干

1．采集外周血100ml
3 X( A1 [3 o- I$ k! r- ]- g* L2．用淋巴细胞分离液分离后洗涤2次，细胞计数后，将分离得到的单个核细胞按照3*106/ml的无血清培养液重悬，将加入六孔板中于饱和湿度37 ℃、5.0% CO2静置2h后收获贴壁细胞；7 C+ {* A; u3 d1 }" w: g' A
3. 轻摇细胞瓶，将不贴壁的悬浮细胞吸掉。在六孔板中加入2ml含终浓度为100ng/ml GM-CSF，50ng/ml RhIL-4的DC细胞完全培养基。' H- W. B  B( b
4．第2，4，6天时对DC半量补液。第7天（24h）后加入终浓度为25ng/ml TNF-ɑ，促进DC成熟。
7 \' |: c2 V9 x# ~. _. u5．第8天收集细胞。  
. i5 X* A0 b! q3 \6 a! @  7 W  y) o8 g6 m7 ~4 @
以上是我培养DC细胞的流程，有几个细节想请教一下：1 细胞接种密度在多大比较好，之前2*106扩增不是非常好；2 接种时直接接在六孔板还是瓶子中比较好，对不同牌子的瓶子是否会影响细胞贴壁效果？3 后期补液时需不需要按照细胞密度重新离心后接种？还是直接补液比较好；4 因子的浓度合适吗。非常感谢                                                                                                                                                                                                                                                      

今世不回眸

个人意见，细胞接种密度到5.0以上，最少要4.0，你DC不添加抗原，很难成熟的。。

mengnancy

1.细胞培养密度4-5.) Z9 m. D9 r2 d5 W7 w5 Q
2.如果不是科研实验,我觉得用培养瓶培养容易收集,培养瓶用康宁的了.
: K+ e7 ~: W" e% i1 E3.在培养瓶接种后2h,将悬浮细胞倒掉,将贴壁细胞用来培养DC.
* ~. l. ^; @( J' N9 k4.后期可适量补液,没有半量换液操作.$ M. b, ]" @3 p( q7 `, E5 g- w
5.细胞因子国产和进口的活性有不同,如果是进口的细胞因子浓度足够大了,如果是国产的,因子浓度合适.

神经干

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. f8 D3 v1 F6 z: Y" ~
5 n# K# Z* A4 V% X- B哇非常感谢

神经干

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; z1 R, r2 Q4 z4 A+ Q: ]( I$ A
  L$ n: m" J1 d+ |- Q哦问一下培养基用GT551可以吗，还是1640

mengnancy

GT-T551培养基可以;1640需要添加10%血清;做实验研究可以选择用1640.