H9细胞转染后加药出现细胞成片死亡，像是没贴紧浮起来一样，请问是怎么回事啊

ailiszhang

求各位大神告知，谢谢啦

ailiszhang

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6 N7 H0 ^. K5 Q6 w1 U; t7 b9 Z4 a$ [' b( v  W9 v3 K
谢谢回答。
- p7 C$ i4 e4 u2 N+ `1 P9 |. t请问阴性对照是什么，有什么作用？药筛过程中还需要设其他对照吗？  n5 l* J9 E: G' _
我做的H9细胞，puromycin筛选，药物浓度最开始加的1ug/ml，死了很多，后来降到0.5ug/ml，第二天细胞就漂了一些，第三天全死了。按照实验室师姐摸索的浓度来加，细胞基本没怎么死。

ailiszhang

回复 hyde 的帖子6 g! u$ _. L, W* C% D: H  Y0 G( J
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我用的载体中没有GFP，只有PURO抗性基因，做的电转，想得到稳转细胞系。' \3 o1 q& N) L. `7 B
我还是不太明白，阴性对照就是没有做转染的正常hES吗？还有阳性对照怎么做呀？克隆大一点具体怎么来判断呢，看直径还是细胞数目呀？你们一般转染后多久加药呢？加药后是每天全换含puro的培养基吗？什么时候停止加药呢？  ! R& @0 s* r3 E1 x* e9 H7 \' N
另外，如果有这方面的文献，可不可以分享一下呢？
: F! e8 q6 z# X) V# T0 z- R问题有点多，可能问得也比较白痴，还请不吝赐教，谢谢！

ailiszhang

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: z8 X! y. ?, k8 h! G4 F/ t4 P% M/ f4 g
这两天克隆中间出现黄黄的东西，而且边缘爬出梭形样细胞，是不是分化了呀？每次加药后的第二天细胞就会死很多，之前我会停止加药几天，这次没停药，继续加了，不知道明天细胞会不会一个不剩，目前的状态看起来不乐观，好心塞。