造血干细胞流式检测结果分析

SKC-SFC

各位大侠，我们实验室目前在做造血干细胞的鉴定。采用流式细胞仪检测，选择的标志物是CD34+CD45+CD133.
; ^, g) X3 J' a2 d% D* S! c! a方法是：标记去红后，用CD45/SSC画R1门，圈定白细胞-画CD34/SSC双参数图，显示R1门，画R2,-建立CD45/SSC双参数图，显示R2门，画R3门-建立FSC/SSC散点图，显示R3画R4门-回到R1门所在图，选择CD45阳性最强和SSC最大的位置画R5门-重新确立R4门的位置-画CD34/CD45&CD45+CD133双参数的十字门，确定R1门的临界位置来重新确定R3的位置。% j6 m4 N" ~' l8 B# A, E2 F
不明白的地方：
' O& t. I0 G/ F6 j! z4 X& `6 z2 E1.CD133的必要性
6 f, @( c# B) f5 y/ y5 g2.最终造血干细胞的统计学数据是R3还是R4的统计学数据？
( J/ \! s* L4 R, n& C% d3.通过R5门来重新确定R4门作用在哪里？6 r6 g, L! u' n3 k7 W( w
4.我的这个实验思路无问题
1 S5 _9 y, Z# i% M, q, g& F求各位大侠指点，谢谢！' N# h  U; v3 M) s) O. p6 `
   

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顶起

nailute1985

1、cd133必要性不是很强，造血干的特异性标记就是cd34+ 所以用双标就可以了。/ ?) H0 Z7 e; K: L
2、你用的是十字门吧？但是我们做造血干的标记的话是用的逻辑门，大体上是这样的：首先ssc／cd45设门圈有核R1，然后R1里面做cd34+／ssc 圈cd34强阳为R2，然后R2里面做cd45/ssc 圈弱阳cd45为r3，然后r3里面做fsc／ssc 圈弱ssc那部分为r4，r4就是结果。. t( @' b) _, A0 \
3、楼主选的是强阳性的cd45吗？我觉得应该在cd34＋细胞群中找到弱cd45的 那才是真正的造血干，并且在ssc／fsc中也要找出ssc弱的那部分。

SKC-SFC

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& v& d7 q& X' U) _8 F. }$ e$ `5 u* S! j6 ?
首先要谢谢您的回复。6 p' R* t5 ?% a
1.选择CD133是老板的意思，因为国外不少文献说，CD34-的那部分细胞也具有造血功能，而且不少国外文献有把CD133加入和协助鉴定造血干细胞。
: d% r8 C/ m0 y. s( ^2.我们这边也是把CD34+中找CD45弱阳性的那群。
7 L0 B5 X+ H9 P; k3.您说您觉得R4就是结果，我一直觉得R3是结果。因为R4不是为了验证这群细胞是否落在幼稚的淋巴群中，只是为了验证？
; U# R  r( ~  ], k4.建立FSC/SSC双参数图的真正意义在哪里？  O. q0 @' s6 f: k
5.设立十字门的目的又对整个结果起啥作用。从实验设计来看，设立CD34+CD45的双参数十字门是为调整R3的位置来设置的哦。
# |' E, w' s" E6.关于R5门的画定，有时候左边的杂细胞群挺多，R5的位置不是那么好花，很担心是把单核细胞群画进去了。

nailute1985

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2 h+ ^, N! t/ t" Z$ Y, @1、你们是研究，我们是临床，所以肯定成本我们会考虑进去，cd133成本会高很多。其实绝大部分的造血干都会表达cd34，剩下的只是极小一部分
8 D1 m& a+ E" M( n- s: [2 y3、R3可以基本确定，R4的用意确实是为了验证这群细胞是否在淋巴群里，但是我觉得r4是很有必要的，因为如果你看r4的流式图的话，会发现r4的范围很宽，所以最后圈r4还是有必要的。不能全圈上，不太准。
! h) [' ~2 I( f5 E( u& `. a$ @4、fsc／ssc这个是必须的，无论做哪个标记。这个就是最直观的看三系分区的状态的。# ]) \* f' l9 v* M
5、其实十字门也不是不可以，但是对于逻辑门来说更合适，十字门分区并不是很准确，会有压线那种情况，不好区分。: x& T; Q1 s9 R; u8 L( ?8 p- `
6、这个是比较常见的状态，因为这跟你去红去的干净不干净，或者血液本身的质量有很大关系。

SKC-SFC

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- k$ k8 Z) w; I. p) c
9 Q( H# Q! x$ i" f1.我们也是临床，只是老板希望我们先累计CD133的数据，通过将CD34+和CD133+的数据进行统计学的分析，若无差异的话，就可以采取CD34+CD45直接进行标记检测并分析。  v% _( J) J5 W3 Y. {  j
2.从您表达的意思来看，造血干细胞应该具备以下几个条件：CD34+，CD45弱阳性，这群细胞是位于幼稚淋巴细胞群里？
* @2 r3 Z; }% X; ]* n$ C0 m, u3 N3.我们画R4门，就是在FSC/SSC的散点图中画的。4 S' {  Y9 o$ r; I# I9 K
4.关于十字门我赞同您的意见。但文献都这么做，不知道是为什么？
0 _5 S* b3 Y9 _5.我们去红还算是非常的干净，有时候做出的我图和文献上一致，结果也好分析，有时候回有左侧拖尾的情况，我们一般是通过调大阈值来去除干扰。因为我们的设备不需要调电压。
+ P) G; U  q6 A6 A3 {6.最后咨询一下CD34+CD45+CD133做同型对照的实验设计.2 y9 z7 G, [2 @. N# h0 I8 M, m7 Q# g
谢谢！

nailute1985

2、并不是cd34+和cd45弱阳，而是cd34+与cd45+的那一群圈出来之后，相对再找出cd45弱阳的那些。对，位于幼淋那片( g9 ^1 T  x  d9 ?! W6 W% |' Y/ P' E
4、十字门在文献中很直观，直接就能看出来双阳或其他的，不像逻辑门，还得一步步分析，文献中是没办法解释的。
9 W, \6 k$ s/ L! w# P6 g6、isotype的话，很简单，不就是要去除非特异性的么，所以只要把cd34和cd133换成同性对照就ok了。cd45依然做阳性管: z2 y0 G0 ?: F% F! Y- e4 h

fm100200

学习了

SKC-SFC

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8 n$ A2 t/ T5 U0 J: E( z
: z. @& d* f0 N2 J# ?  _谢谢.

yuanyecat

上图啊没图没真相啊