造血干细胞流式检测结果分析

SKC-SFC

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4 e6 g* L8 K6 o% D% |$ o% i! Q7 E  c) y% ]+ O6 }' o4 v
这个地方我有点糊涂了。我们以前做表达量高的时候，基本就不做补偿，直接做空白的细胞对照。现在这个造血干细胞因为表达量极低，必须做补偿。我看文献上都说是用同型对照（阴性对照）去调补偿之后，再测定单个的项目？

nailute1985

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$ ~* o, A9 R- W4 k% x- Q
" Y) E1 P5 G, [: [% y1 l# C9 C对 你是fitc跟pe吗？那你第四个不用调 123都需要

nailute1985

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, I! D; ~" W+ J: D" ~! S
你一开始的阴性区的阈值就是用同型对照来调的，所以阴性管你就不需要再调了对不？

SKC-SFC

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7 r; \! D1 L  m; {0 W  O8 C3 ]9 d: e
好的，谢谢！您的意思就是：1 Y% q2 m/ @( w# ]4 @# F  a% G
1.样本品管仲加入待检细胞+CD34-PE+CD45-FITC+CD133-PerCP,对照管加入待检细胞+CD45+CD34-PE和CD133-PerCP的同型对照抗体
9 z% U- @9 M/ v1 I, t& Q# ?0 P. u2.测定对照管，根据检测情况调补偿和阈值。调至合理范围。通道之间无荧光干扰。; K1 Q# z* G& N& N+ G, K1 K$ b# L8 K
3.检测样品管，画3个图FL1,FL2,FL4进行分析。这个时候还需要话FL1/FL2，FL2/FL4，FL1/FL4的十字图吗？

SKC-SFC

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! s8 x3 P# H/ v5 ]9 e$ c" }
我想了一下应该是这样：0 R; _" @3 u8 p& y% b# _/ k9 P
1.样本品管仲加入待检细胞+CD34-PE+CD45-FITC+CD133-PerCP,) K" @  }* k% R2 w( r7 ?
2.阴性对照管加入待检细胞+CD45+CD34-PE和CD133-PerCP的同型对照抗体
3 Z& d8 ~! S, d, ]$ P3.补偿调整管：需要3管，一管是CD34-PE+细胞+另外两种抗体的同型对照抗体，以此类推
+ g9 {% k+ d3 z4.根据检测情况调补偿，调至合理范围。通道之间无荧光干扰。1 r$ G# p4 @$ a# G% k
5.检测样品管，并分析.

nailute1985

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! b2 U3 o$ K# f3 }2 q  T是这的没错

nailute1985

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4 ~0 N, Q$ f/ y) U# W
十字门不需要的～你这个是逻辑门，例如：只要把阳性管中FL1的名字改成isotype就行了

SKC-SFC

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) x8 S- `  e7 @9 O5 \: W
5 n+ Q, \8 k  Z7 @% [9 _# _您好，最近我们又做了造血干细胞的鉴定实验。有几个问题我需要咨询。6 T' s- y. M3 g  e; F  E0 L8 b
1.在检测同型对照的时候，是需要先划门吧？这个门怎么划？
' K4 y1 C7 Z1 x3 K3 o2 e9 T  Y1 Y2.在调补偿的时候，为什么3和4通道的荧光没有干扰，不需要调整呢？而1和4通道反而需要做出调整呢？$ f+ e2 n. w4 w4 \! Q
3.我看文献上说，逻辑门R4显示出来后，还需要去除比淋巴细胞还小的那一群。但看不出来这个是怎么划新的R4门的？

SKC-SFC

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" O" |; Z3 ]7 Y8 o2 Z% M
R4门比较宽，说是需要进一步去比淋巴细胞还要小的那部分细胞或杂质。大概方法是从SSC/CD45的散点图中选取淋巴细胞那群，然后设为R5，然后重新简历FSC/SSC散点图，把R4门复制到此图中，并显示R5，说门划到SSC最低和FSC在100的位置，这个200是左边起还是右边止呢？但得到的结果15%以上，这样的结果不对啊。另外有个样本的同型对照荧光比检测荧光还要强.3 _7 g1 @" D( Z/ j4 H5 ]. k# S2 _
多谢回答！

nailute1985

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: f' w! s7 s% {5 ^( l  U( K1、同型对照的门当然跟你cd34门是一样的 要不怎么叫做同性对照% A& s; o- a7 F1 H
2、这个需要看你用的是什么荧光材料了……1、2、3、4四个通道的发散光谱是不一样的。3和4差的比较多那肯定就不需要补偿啊，1跟4差的少，光谱有重叠，那就需要补偿。
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