原代的脂肪间充质干细胞变成了脂肪细胞？？？

Cyclone2009

取得SD大鼠做了脂肪间充质干细胞的原代培养，现在是第7天。3 v) U1 i2 [  \8 Q$ p
今天用高倍镜看发现聚集在一起的细胞，尤其是中间部分，胞浆里面出现又圆又亮的小泡，像脂肪滴一样。。。
  n' j% z. t( l- x% s9 q我都没有动它，难道自己分化为脂肪细胞了？还是脂肪间充质没提出来，提出来的根本都是脂肪细胞呢？/ Z* T. c6 I6 L* G
请有经验的战友指点呀   培养液是DMEM+10%FBS
  K  H. t. W* \) q( M上图：：
) }6 i) P+ B9 F7 N8 U, [4 a5 x6 S3 ^+ N7 ~0 [- N" [+ ^

8 ^# l' M* Z7 K3 k! I! X- D5 r3 D9 w& [4 j
+ a1 [& X, v+ I

Cyclone2009

还有，我怎么感觉细胞这么脏呢？中间黑色的颗粒是什么呀？？

Cyclone2009

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. ^. x& Q3 R) ~7 p9 r
# \, e& g1 \- N# b1 K6 ]/ ~8 ?是呀，根据文献和论坛里的经验贴提取的SVF.: L. ^/ B& W- o: y) d- b6 k
大致的步骤是：$ I% j. u1 n" {5 a6 a1 U8 e
SD大鼠200g左右，断颈处死后酒精浸泡5分钟，取腹股沟脂肪组织，剔除血管和筋膜，剪刀剪碎，加0.1%胶原酶，37摄氏度摇床60min消化。之后加入培养液中和，反复吹打，300g离心5分钟，去除上层漂浮的脂肪组织和上清液。沉淀再次用培养液悬浮，离心300g 5min，小心吸出上层的油脂。最后取沉淀悬浮接种。。' B# E) P: {; ~# ^. j# Z
我没有用到滤网和红细胞裂解液。。

Cyclone2009

回复 baicaikua 的帖子& \5 `: p8 v3 ?& m
! S8 O* ]9 E) S) z: c' Z
还没有消化，这是P0

Cyclone2009

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7 ?, Z3 t. o/ h7 }5 O( ~* [6 `4 W8 ]4 @
想问问你是怎么看出来细胞老化的呀？老化的细胞都有什么特征呢？我感觉我的细胞增殖还蛮快的，double time基本就24-30h。。
2 D, C$ F  s. l' s% x+ \' V# t养细胞新手，求多指教呀

Cyclone2009

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- Z3 `( k; h: S* T6 l7 X
8 \: H2 U; v. [这是当时消化了60min，不过条件我一直在优化，又做了一批是消化30min的，等看看细胞会不会好点。。。
% U, M& I. `9 eanyway, 谢谢你呀