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凋亡细胞特征:
凋亡蛋白的出现和增多(caspase 含半胱酰胺的天冬氨酸蛋白水解酶);
线粒体跨膜电位下降;
DNA被胞内的核酸内切酶在其核小体之间随机降解;
细胞体积缩小、核固缩以及形成凋亡小体
1.形态学观察
凋亡细胞因核断裂形成二倍体;
2.DNA凝胶电泳法
凋亡细胞中晚期,DNA被核酸内切酶在核小体上随机降解,产生180-200bp倍数的DNA片段
3.TUWEL法
TdT dependent dUTP-biotin nick end labelling
凋亡细胞中内源性核酸内切酶被激活,细胞自身的染色质DNA被切割,出现单链或双链缺口,并产生与DNA断点数目相同的3-OH末端,末端脱氧核酸转移酶(Terminal deoxynucleotidyl Transferase TdT )能将脱氧核苷酸连接到DNA的3’末端。荧光素(fluorescein)或者生物素(biotin)标记脱氧核糖核苷酸,在TdT的作用下连接到凋亡细胞断裂的DNA3’-OH末端,用荧光显微镜即可观察结果。在此基础上连接辣根过氧化酶标记的荧光素抗体,即可进一步放大检测型号。
4.AnexinV-PI染色法
AnnexinV是一种磷脂结合蛋白,在生理钙浓度下能与磷酯酰丝氨酸(PS)高亲和力特异性结合。PI(碘化丙啶)是一种能产生荧光的染料,不能透过完整的细胞膜,但能透过凋亡中晚期的细胞和死细胞的细胞膜
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GMT+8, 2025-5-1 20:12
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