人乳腺组织的WB怎么老是出现非特异性条带

ind6562

2016-1-11 10:33 上传

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: R0 ]) v9 A- z9 l" i$ X5 ?第一次上传图片，希望大家能看得到。
7 n% A' w: M. J; g1 H" k# v' S3 |如图所示，这是三个不同病人的乳腺组织所提取的蛋白的WB结果，做的是b-actin。从上往下数，第三条是正确的b-actin，其他的都是杂带。现在小弟主要面临两个问题，一是其他杂带在不加一抗、只加二抗的情况下也会出现，试过用不同的二抗也一样；二是我的蛋白上样量不低，40微克左右，但大多数的样品做出来的结果就跟左边两个一样，非常淡，内参这样，其他目的蛋白就更不用说了。这样到底是我提取蛋白的问题，还是这本身就是乳腺组织蛋白的特点呢？b-actin是否不适合做乳腺组织的内参呢？* v- d* a  A! b) i; h  Z$ z
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你封闭是怎么封闭的。