六孔板加胰酶量

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回复 Tracy-Cui 的帖子3 C  D4 p0 [  P3 [6 R

% F4 {- t/ K$ q谢谢

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+ k' f* j! _6 _, Q% A回复 hefan1234 的帖子
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) c. c3 l( Z+ N- d当未脱离底面，但细胞间粘连消失时可不可以物理敲击使细胞脱落  然后终止消化？

hefan1234

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" ]: z' X! Y9 b* i  d) }: n! M最好还是等细胞变圆之后再轻轻敲击，其实本来是不应该物理敲击的，但是有些细胞贴壁比较牢固，胰酶作用时间太长对细胞膜的损害越大，所以轻轻敲击加速细胞脱落，其实用移液枪吸液吹打培养瓶底面也是可以的。

1195963542

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9 y' H) N$ @  \( `! }% c7 @+ t# m/ d好的 谢谢

zmfang555

还得看你是什么细胞，如果是293，293T等贴壁不牢容易消化的细胞,6孔板0.25%EDTA每孔加250UL足已，一般3min就有针眼状出现，这时就可以准备血清终止消化了，如果消化的细胞继续传代，胰酶应尽量少加，覆盖孔底即可，如果用来做实验，稍微多加一点无所谓，但是应尽量减少消化时间，以免对细胞造成伤害。

蚂蚁上树

加入200-300ul就可以了，足以覆盖孔板底面，然后放到培养箱消化，快的话半分钟，慢的话3-5分钟，放到镜下观察，细胞变圆就可以终止消化，终止时用枪头吹打下，就可以了。

晗晗

少于1ml，零点几毫升吧

随时准备下线

回复 yinchong42 的帖子+ s! d- ?) |4 J& R
4 [2 ?1 Z3 E! Y% f/ e8 {5 u& X% `
24孔板边缘效应严重，加入的胰酶不是平铺在孔底的，为了达到覆盖全部孔底，必须多加

sfnana

我们一般加1ml，0.25%胰酶（含0.04%EDTA，无钙镁）,消化2分钟左右，镜下观察细胞变圆，加等体积的培养液中止消化，用枪轻轻吹打细胞，收集离心，进行下一步。胰酶对细胞的伤害比较大，所以镜下观察，及时终止消化非常重要。

UlissesJR

无论用什么类型培养器皿，加胰酶的量能够覆盖底部即可，多了也是浪费