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1、用immobilized anti-CD3抗体刺激T细胞活化(即包被),原理是固相结合的高密度anti-CD3抗体可引起T细胞TCR-CD3复合体的交联,直接产生活化信号,不需要第二信号的辅助。也就是说在没有任何抗原提呈细胞(APC)或anti-CD28等抗体的存在下,就可以刺激T细胞活化。) {- U: s0 _! D% D2 X0 Q
& @/ Q; c. m- ~常用包被抗体浓度是5 ug/ml或10 ug/ml,浓度的选择要根据自己的需要。如果培养时间3天左右,希望有很强的增殖可选高浓度,如果培养时间较长则选低浓度,因为高浓度虽然诱导增殖能力强,但活化诱导的凋亡作用(AICD)也很明显。2 N$ d- I1 [) N
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2、用soluble anti-CD3刺激T细胞活化,必须有第二信号的辅助。也就是培养体系中要么有APC,要么加入anti-CD28等抗体。因此,分离纯化过的T细胞如果只用可溶性anti-CD3刺激是不能增殖的,但用包被的anti-CD3就可以。8 g1 U: _; e* e$ `' w* x% r
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常用的可溶性anti-CD3抗体浓度为0.5 ug/ml 或1 ug/ml。在我手里,有APC存在的情况下,二者刺激T细胞增殖能力没有明显差别,所以我认为0.5 ug/ml 的浓度已经饱和了。Anti-CD28抗体的浓度与anti-CD3一样。
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; d# B/ ]3 H0 l( |# ^( H* U: \再次强调,如果想长期培养,除了适当加入IL-2外,初始刺激一定不能太强。 |
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