牙髓干细胞培养过程中遇到的问题

saliai2016

经过原代分离牙髓间充质干细胞，大约10-14d后便可以传代，但是在传代的过程中我发现了两个问题：
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第一，不同样本细胞形态有差异，有的样本细胞形态非常小，立体感比较强；有的样本细胞形态比较大，平铺伸展立体感不强；这两种细胞形态的样本在同样底面积的培养皿中长满后，细胞总数会相差近一倍；细胞形态小的细胞总数多。
  A5 {* l1 l* K# @- L第二，牙髓间充质干细胞在传代或冻存复苏后其表面标记会不会出现丢失的现象，即冻存前和冻存复苏后的流式结果差异很大
+ i0 c4 c9 i  I& e! m0 \. g  }以上问题还请细胞达人给以指教，多谢

juzideds

我想向你请教一下牙髓干细胞分离培养的基本流程，刚想入门，大神可否带带我

saliai2016

回复 juzideds 的帖子4 c2 m7 v# X8 |/ C7 y" C8 v
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我也是刚刚入门的选手，刚开始做4个月

大少爷

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5 R: T6 C( B5 q' f( v" a9 j$ j# I$ k' m: U& H) [* o, w- E. D" Q
请问，牙髓干细胞制备方法这一块有什么要好的技巧和制备方法？

sryanhong

牙髓来源很重要。对比一下这两种不同形态的干细胞来源的个体差异。细胞大小不同细胞量肯定是有差别的。细胞小，同样的面积细胞量肯定多

大少爷

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: O0 q2 r# v% X& S, M) ?% D你好! 最近和同事也在做牙髓干细胞的提取和制备，采用了酶消化和组织块培养法，不知道为什么没有细胞长出来，不知道是不是有好的方法技巧可以分享下，谢谢！

sryanhong

回复 大少爷 的帖子6 r; B# k; t1 k6 ~9 J: o

) d  g8 t, b7 g* l抱歉，我没养过牙髓干细胞，养过其他间充质干细胞。经验就是酶消化法一定要控制好酶的浓度和消化时间。还有就是你的培养基是否选对，这些都是很关键的，多做几次慢慢摸索经验最重要。别人的经验不一定适合

saliai2016

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( {1 X: h5 k* G& r1 H方法是什么，根据文献报道II型胶原酶+中性蛋白酶便可温和分离得到游离的牙髓干细胞，30-50min静止温浴。具体的你看看参考文献，基本上都是一样的

大少爷

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# k8 U) A0 n9 [' Q* ~' a: |1 d谢谢，解答，问题已经解决。