定量实验影响CP值的因素？

gxbzjznn

大家好，我最近在做定量试验，发现每次定量出来的CP值波动性很大，希望各位前辈和各位同仁一起讨论一下影响定量实验的一些因素，并提出解决方案。谢谢！！！

leizhao1229

个人觉得最关键的是加样要准确，建议：
$ T0 W) q. r, s( w; x  B5 W0 f& v至少做3个平行孔，看数据的时候可以去掉一个离群值再取均值；
; i0 D& `+ q# R3 @( C能混合的先在一个管子里充分混合后再分别加到每个孔中；
0 X4 m$ ?& i% w' A! E祝顺利！

leizhao1229

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! O0 v% M7 K) L; J' g0 p. X: T7 f0 O% e- U" v) G
个人觉得最关键的是加样要准确，建议：
: V6 R0 Z6 R  V0 K5 p5 T& M- n至少做3个平行孔，看数据的时候可以去掉一个离群值再取均值；# U4 r/ ?* p2 k9 I; u( m% g
能混合的先在一个管子里充分混合后再分别加到每个孔中；
. A. N& y, H1 @7 M; m% K祝顺利！

gxbzjznn

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! j' B0 S+ M, W2 G. y# r5 `) N; w5 F) O: r" i; b
感激不尽！我们是点的三个重复孔，三个值减去内参的平均值来计算的！

gxbzjznn

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3 W3 w1 t8 F& o/ n& E' [
( z$ B* r* r) i3 Q# ^你们是用单内参还是双内参？

leizhao1229

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; O+ B9 p" |( {
/ Z$ a1 K  h2 Q; Y: ?) U( g4 \单内参

gxbzjznn

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) Z" c$ X$ {0 k: ~5 g
/ b, M( l# r9 S! z) [7 q单内参可以说明问题吗？我做的双内参，但是出现一些回避不了的问题

jddakui

三个因素 1 、扩增效率  模板量和模板质量  梯度稀释  2  、 至少3重复     3、 内参   多个内参或者更换内参

leizhao1229

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6 J6 i# n& i! g& f3 k- b9 P
9 y0 F0 N! c' Z" W如果内参稳定的话，单内参也可以吧，当然，双内参更严谨一些，什么避免不了的问题呢？拿出来大家讨论一下呗，我也学习学习哈

gxbzjznn

回复 leizhao1229 的帖子$ r& O4 C/ ~/ |! U6 f$ ^
' Y# u% T+ d- |
你们做的基因表达量升高的最大的倍数有多少？