求助：自体血浆的处理

gengtongyu521

回复 seergene 的帖子
) d1 Y. {8 z  W# c0 j1 R( H2 ~( ^! _! n/ [# A1 V
谢啦  我用的是AIM-V培养基。

拉二胡的拉尔夫

这里分享一下我的实验经验：6 \# P7 B/ s: H$ D  Y$ V
1.絮状物有可能是未去除的纤维蛋白原造成的，可以通过增加一点点Ca离子拮抗去除，或者通过反复冻融离心去除。* L2 @" M. v* U6 r
2.枸橼酸处理的血清刺激增殖的能力比肝素查很多，所以肝素首选，枸橼酸次之，EDTA在次之。/ c8 L6 T; b2 C8 B' l# y# @
3.AIMV培养基是医用临床级别的，但是他前期刺激细胞增殖的能力很一般，所以更需要高品质的血清辅助。
. E. f; ]* h& m' G5 }$ M3 K希望能帮到你。

seergene

回复 gengtongyu521 的帖子/ s. H* I% M, w
3 s, v" k9 J3 A" D4 T
AIM-V也用过，跟T551一样也会出现絮状物或培养基变成凝胶的时候。有人说是培养基或血浆中纤维蛋白原导致。我试过不加自体血浆培养过，同样会出现这样的问题。至于培养基中有没有纤维蛋白原，就不太了解了。还有人说是死细胞导致，个人认为可能性不大。这是版主推荐的以前讨论的帖子。
: @; v" Z% E5 {  P6 F$ d5 q6 phttp://www.stemcell8.cn/thread-69130-1-1.html:

mengnancy

56℃灭活后4000转离心，取上清，添加自体血清的浓度过高了吗，一般0.5%-1%；另外细胞接种的浓度是否过大，红细胞是否较多，细胞增殖太快，营养不足引起细胞凋亡等，排除找下原因。

why77yhw

1.血浆不是必须添加的，只是提供营养成分，但如果培养基中的营养成分能够满足生长需要，可以不添加。
$ w7 E5 m' L7 e1 @2.如果发现添加血浆后，细胞生长效果不好，应停止血浆的使用。
, i' V; e# ~7 i1 T+ p8 z% [3 k0 W4 |3.血浆灭火后需要离心去除补体，一遍不行就再离一遍试试看，应该还会有补体被离心出来。2 h+ Q7 C7 A, [; \4 i
4.供你参考：1.如果细胞体积不大，收集细胞，重新接种。  N% M0 i+ {, t- _7 R
                     2.接种前，吹打细胞，尽量吹散，吹不散也不强求哦~6 c7 X1 J# T5 n0 X3 \6 c
                     3.对细胞进行活率检测3 ^, P5 L) d' i- [
                     4.调整到合适密度重新接种！
* b0 n8 G/ i# @9 E9 g) \4 j                     5.如果细胞活力低，检测下内毒素和支原体，排除掉其他因素。

why77yhw

另外还要补充，添加点人血白蛋白进去，能一定程度缓解，但因人而异，很具有特异性！试试看吧

免疫与细胞

血浆每次使用之前最好离心一下
7 M/ \4 B" w% F9 b$ m8 a+ x
& m$ a% c0 c# W1 T) W9 T  Z6 _因为在低温下即血浆存放于冰箱的过程中，血浆内会析出一些物质，导致絮状物出现。

994545

血浆用在前几天就够培养增殖了   后面血浆在4℃保存的质量不能保证。    如果是前期的絮状物的话：漂浮的可能是血液里的脂类，  还有就是粒细胞分泌出来的物质及培养适应期死亡的细胞（这个可以在显微镜里看出来，对比前几天的细胞团状态）  后期的话只能往污染这方面想了（表示没遇到过）。