求助：自体血浆的处理

gengtongyu521

回复 seergene 的帖子* e0 F& J2 ^3 m2 _+ J
7 a4 x/ L9 `: h6 ?) e. E
谢啦  我用的是AIM-V培养基。

拉二胡的拉尔夫

这里分享一下我的实验经验：
- G* H: B8 o. N( F1 W1 D# U. Q1.絮状物有可能是未去除的纤维蛋白原造成的，可以通过增加一点点Ca离子拮抗去除，或者通过反复冻融离心去除。$ c; _: P( B0 r7 [/ _6 l! B
2.枸橼酸处理的血清刺激增殖的能力比肝素查很多，所以肝素首选，枸橼酸次之，EDTA在次之。5 d% `# s, s) V6 L5 z! l5 o
3.AIMV培养基是医用临床级别的，但是他前期刺激细胞增殖的能力很一般，所以更需要高品质的血清辅助。& f' [9 G. k+ P* T
希望能帮到你。

seergene

回复 gengtongyu521 的帖子/ U: N! k' I8 }  Z" S

2 T1 h* _: R  O7 c+ cAIM-V也用过，跟T551一样也会出现絮状物或培养基变成凝胶的时候。有人说是培养基或血浆中纤维蛋白原导致。我试过不加自体血浆培养过，同样会出现这样的问题。至于培养基中有没有纤维蛋白原，就不太了解了。还有人说是死细胞导致，个人认为可能性不大。这是版主推荐的以前讨论的帖子。
2 {* g- D  B: ^- Y8 ihttp://www.stemcell8.cn/thread-69130-1-1.html:

mengnancy

56℃灭活后4000转离心，取上清，添加自体血清的浓度过高了吗，一般0.5%-1%；另外细胞接种的浓度是否过大，红细胞是否较多，细胞增殖太快，营养不足引起细胞凋亡等，排除找下原因。

why77yhw

1.血浆不是必须添加的，只是提供营养成分，但如果培养基中的营养成分能够满足生长需要，可以不添加。) t+ i: h- P, h
2.如果发现添加血浆后，细胞生长效果不好，应停止血浆的使用。+ ~* I& W1 h  u4 ?
3.血浆灭火后需要离心去除补体，一遍不行就再离一遍试试看，应该还会有补体被离心出来。
5 Y6 b' W9 [( N, }$ v5 c4.供你参考：1.如果细胞体积不大，收集细胞，重新接种。+ C; M/ N$ `" V) F# a
                     2.接种前，吹打细胞，尽量吹散，吹不散也不强求哦~+ O" Y$ w. \6 d6 M
                     3.对细胞进行活率检测* W4 v! N9 T/ M2 c
                     4.调整到合适密度重新接种！) X9 F/ m' z- g- W( h! ?. R
                     5.如果细胞活力低，检测下内毒素和支原体，排除掉其他因素。

why77yhw

另外还要补充，添加点人血白蛋白进去，能一定程度缓解，但因人而异，很具有特异性！试试看吧

免疫与细胞

血浆每次使用之前最好离心一下
1 J" S; l. J6 V) S% L0 Y2 W: S
8 S3 w. J8 \5 Q3 C因为在低温下即血浆存放于冰箱的过程中，血浆内会析出一些物质，导致絮状物出现。

994545

血浆用在前几天就够培养增殖了   后面血浆在4℃保存的质量不能保证。    如果是前期的絮状物的话：漂浮的可能是血液里的脂类，  还有就是粒细胞分泌出来的物质及培养适应期死亡的细胞（这个可以在显微镜里看出来，对比前几天的细胞团状态）  后期的话只能往污染这方面想了（表示没遇到过）。