请问这个侧群细胞实验左下角那一团细胞是怎么回事？

haha224

如图，X轴是Hoechst Red ，Y轴是Hoechst Blue，图片上显示的是DAPI，这个侧群细胞实验左下角那一团细胞是怎么回事？右图中文字是DAPI，对应的是Hoechst Blue，大峰前为什么还会有一个小峰？

baby00000003

也许就不是细胞吧，只是非特异性的渣渣0 a5 C8 E3 M' ~% i
因为渣渣体积很小，所以A，H，W也都比较小

lyj-0017

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" V1 J: K  ?1 O% z# {1 \0 u) V2 S) r) y3 `% s9 [3 X
应该是没有设置阈值吧？所以可能一些小碎片也计算在内了

haha224

/ {" o6 a3 Q4 [5 }8 x( W5 p3 a% a
; W5 ~  E4 N: P1 ~( T5 c  G
回复 lyj-0017 的帖子: I9 h+ r$ v1 l( l( C# y; X- ?% R; g$ r

/ p5 Z! W' u( U' x可是已经圈门了啊，按理说不应该是碎片的
4 p. W( r9 f1 B& E1 X8 `) S# h- D+ k8 s! |

haha224

回复 baby00000003 的帖子: n  g& ?& j) N' K4 r  a8 j

8 t9 D1 ~0 Y/ ]# D7 \: F9 r可是我已经圈门了，也用PI去死细胞了，图在回复里有，做了2次都是这样，还有没有什么可能吗？

baby00000003

/ j4 C8 S( \9 K% ^
) K! p3 y( \7 g重新看了一遍，也许可以这样解释（纯属瞎猜哈）
" N) l. {: i  ~% N5 C$ A, hH blue可以大约表示DNA含量，这一大一小2个峰表示“G0和非G0的细胞比例”，也就是说这一群细胞大部分处于“细胞分裂的循环”4 P4 ]' Q& T2 Q. Q+ A
H red是没有结合DNA的“游离H”，如果计A的话，可否表示‘细胞大小’呢，和FSC意义差不多？这样第一图的解释就是“G0的细胞DNA含量较低，细胞体积也较小，所以在左下角上，而分裂循环的细胞相反，偏右上”
. F! R" H  @. R8 P
+ ~% D! Q  Y: o; q) z7 A9 P顺便一问，这个H red和PI不会在同一波长上重叠么？你是如何用PI除去早期凋亡，同时又能检测H red的？

haha224

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5 g, P( Z& ?2 m& H, u+ @3 d8 g, V
. Q9 K, G; k' A  v0 M# K& B( S这个我具体不是太清楚，看那些protocols，都是有加PI去死细胞的，可能是H red的激发波长是355 UV，检测是 675nm，而PI激发波长是488 nm，检测的波长在585 nm附近吧

baby00000003

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: Y% u" Y. y9 v' ^" [嗯，查了查，H red是ex350nm，em520nm左右，PI大约ex488nm，em617nm，还是可以分清楚的～