新手求大神解救啊，大鼠间充质干细胞消化时成片脱落，很难吹打成单分散细胞悬液

野猪

问个问题，你一般培养多少天后传代的？& ]# N/ e# `0 D7 [

cqhechuan

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9 @" Z: I7 {+ W! u  B7 c. s) |& M
. o" p' T. B% I5 b0 u" L我也觉得是，现在准备重新配置胰酶

sithbj

Increase the concentration of your enzyme

optimus

回复 cqhechuan 的帖子+ y1 v" g# @" h' V

- g5 U/ I# k0 [- p. L: V* B成片掉也可能有楼上提醒的情况，就是细胞培养太久了，长成一团团的了。消化的时候也会成片钓。

1276916287

可能有几个原因：第一，细胞接种时密度过稀，导致可传代时培养时间太长，贴壁太牢，细胞不好消化；第二，胰酶失效了，消化时间太长，导致细胞受损吹打不开

cqhechuan

回复 野猪 的帖子) f; b* _' l" D7 _7 }0 i. w/ Y
  ]" {& Y$ B" O% n% x
两天就长满了，这个长得很快

cqhechuan

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回复 baby00000003 的帖子* G! `; A! `2 b3 F" u- @! w

. ~& c' N7 y3 H我今天新配制了胰酶，但是发现新胰酶消化得很慢，8分钟才有很多变圆变亮，仍然有很多细胞是伸展的。
6 V% m9 p: s& q# n然后用以前的胰酶发现很快就成片地掉下来漂浮起来了。所以我觉得不是胰酶的消化能力的问题。但是我现在仍然不知道什么问题。
6 o' ~% ~5 Y; |  [6 a: t不管是新胰酶还是旧胰酶，都不能消化吹打成单分散的细胞悬液。

baby00000003

" C( D  k2 l; b0 m/ H% X+ v+ k& f
. {* c5 O3 V. _1 L6 ^回复 cqhechuan 的帖子2 {: ^, H4 H, R  l- j
/ x$ u5 [4 Z1 w% n' e* ], @' m9 [3 e
这还真是让我猜不出为啥了......新配的是0.25%porcine trypsin＋0.02%EDTA？: u7 Z' W% H# |7 A8 r. k9 K
要不买一瓶成品的酶试试看？: V! M, {6 A9 |% A' l8 |
嗯.....死活下不来的细胞建议扔掉哈～

cqhechuan

回复 baby00000003 的帖子/ |2 u& s2 C7 Y4 j

9 K7 {$ L0 `* b! h没有加edta，据说对细胞有伤害。
- O5 M) v) S4 m$ t* I* z. P  v这已经是我养的第二只小鼠的bmsc了。应该不是细胞的问题，但是又不知道是什么问题

zhu1019

可以使用含EDTA的胰酶消化，可以把成团细胞分开的。细胞长的太密的话也会出现成团的现象，建议70%-80%传代。