新手求大神解救啊，大鼠间充质干细胞消化时成片脱落，很难吹打成单分散细胞悬液

野猪

问个问题，你一般培养多少天后传代的？
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cqhechuan

回复 optimus 的帖子  O4 @3 x9 |, J9 x+ N8 d
2 U6 n# ?, V3 `. }" U
我也觉得是，现在准备重新配置胰酶

sithbj

Increase the concentration of your enzyme

optimus

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9 }; ^7 Z- }4 n+ z% T- \* x- U3 }
" p( [+ a' N# m2 S9 [& ~. W. {7 b成片掉也可能有楼上提醒的情况，就是细胞培养太久了，长成一团团的了。消化的时候也会成片钓。

1276916287

可能有几个原因：第一，细胞接种时密度过稀，导致可传代时培养时间太长，贴壁太牢，细胞不好消化；第二，胰酶失效了，消化时间太长，导致细胞受损吹打不开

cqhechuan

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4 Y% @" e! X: o5 w/ Y- E( H
$ G& K0 d% d  D7 ^, X两天就长满了，这个长得很快

cqhechuan

3 a, U% P) [8 ?2 Y/ j' B- B
( `, ^- \3 W! d2 a
回复 baby00000003 的帖子' D" @# d" u8 p' ]

' O4 J2 D( I# Q; }  G. j: T我今天新配制了胰酶，但是发现新胰酶消化得很慢，8分钟才有很多变圆变亮，仍然有很多细胞是伸展的。+ k2 |0 @$ q, o2 d2 V' K
然后用以前的胰酶发现很快就成片地掉下来漂浮起来了。所以我觉得不是胰酶的消化能力的问题。但是我现在仍然不知道什么问题。
- K# `$ i( J" O! O9 x不管是新胰酶还是旧胰酶，都不能消化吹打成单分散的细胞悬液。

baby00000003

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+ ]9 ?1 y- a! [" t  X6 A: E) h( I回复 cqhechuan 的帖子5 s2 ?4 I" H9 k! R( p" W3 q
1 R0 V, E9 \( [
这还真是让我猜不出为啥了......新配的是0.25%porcine trypsin＋0.02%EDTA？( }; y. f+ ~* G. {; X& D
要不买一瓶成品的酶试试看？
  O7 @' ]1 |7 [; ^$ T/ U+ z% M嗯.....死活下不来的细胞建议扔掉哈～

cqhechuan

回复 baby00000003 的帖子8 \9 a) _7 \$ T0 Y! a! m+ D0 ^) I+ c" p
* a( }# m6 U! l4 s4 B! k
没有加edta，据说对细胞有伤害。' M% [# r# q2 X8 o' [7 @
这已经是我养的第二只小鼠的bmsc了。应该不是细胞的问题，但是又不知道是什么问题

zhu1019

可以使用含EDTA的胰酶消化，可以把成团细胞分开的。细胞长的太密的话也会出现成团的现象，建议70%-80%传代。