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gxbzjznn

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11楼

发表于 2016-4-8 16:12 |只看该作者

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gxbzjznn

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12楼

发表于 2016-4-8 16:14 |只看该作者

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我觉得克隆后测序结果没有PCR产物直接测序可靠。而且非常确定。但出处我忘了。PCR会有错配，如果直接PCR产物测序时正确的扩增会掩盖错配，因为错配的比例一定不会大于正确的延伸。如果是对PCR产物克隆，事实上只是测的数百万条扩增产物的一条，存在一定的可能将错配的产物连到载体上，具体比例跟错配发生的时间有关，错配在PCR早期那么克隆到错配序列的比例就高，反之低一些。

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gxbzjznn

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13楼

发表于 2016-4-8 16:14 |只看该作者

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我觉得克隆后测序结果没有PCR产物直接测序可靠。而且非常确定。但出处我忘了。PCR会有错配，如果直接PCR产物测序时正确的扩增会掩盖错配，因为错配的比例一定不会大于正确的延伸。如果是对PCR产物克隆，事实上只是测的数百万条扩增产物的一条，存在一定的可能将错配的产物连到载体上，具体比例跟错配发生的时间有关，错配在PCR早期那么克隆到错配序列的比例就高，反之低一些。