小鼠骨髓胫骨移植心得

hyde

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0 B) p- }" J* V9 i3 ^目的：通过胫骨注射进行小鼠骨髓移植% f, j( E1 y# q
整体操作过程咨询自天津血研所
5 r, X; l0 J: M对于熟练掌握该技术的人来说这门技术真是太容易了…（感觉所有的细节都是理所当然）…所以咨询后还是有点迷糊，哎，感觉自己悟性不够。只能牺牲一些小鼠来积累经验。  b% q' @' H' x$ M1 T7 ~7 E1 @
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1，小鼠需要麻醉，常规的操作不再赘述。
7 v3 O& {$ g( f& Z! n  N+ Y2，左右两条腿应该都可以做，不能浪费小鼠。新手，在膝盖处剃毛。起始酒精打湿后皮肤下的韧带（是吗？）和胫骨走向基本可以确定。
2 T/ ~; v/ f- k5 u. `3，从白色韧带处入针（微量注射器50ul）。针和胫骨应该是平行，差不多在一条线上。沿着胫骨走向旋转注射器转入。（目前还没有体会到那种入骨后的突破感，只能根据模糊的感觉停止入针，开始注射）。
2 @( a# {0 i2 M, l  m1 o, W! j4，注射10ul胎盘蓝，解剖小鼠观察是否注射成功。（好像胎盘蓝会溢出，不知道10ul体积是不是太大？）
, M( \7 r% j. s; M: u6 {5，等注射成功率稳定后还需要观察注射后小鼠行为是否正常，不确定胎盘蓝注射后小鼠会不会死。是否会导致小鼠行动不便？7 p6 Z8 V9 h; j/ _8 P  z

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gxbzjznn

注射10ul胎盘蓝？个人觉得体积有点大

hyde

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咨询说可以注射10ul体积。你有经验吗？求指教

yinchong42

50ul微量进样器是不是针头有点多大？请问是什么牌子的？我觉得胰岛素注射器或许可以

hyde

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没比较过，暂时参考别人的指导，不做修改，目前练习下来不会太粗

yinchong42

回复 hyde 的帖子) V3 N# G" ~' I* M2 [! B" k" x

0 _. T1 m$ O2 j我们之前的预实验感觉，10ul差不多是2月龄C57和balbc股骨的容积了，用微量进样器基本上也就只能打进去这么多，胫骨的话10ul似乎有点多，不过可以试试；$ f, ~: S8 s0 S( _. _
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我们打的是溴酚蓝，注射后15分钟心脏取血或取出肝脏，观察如果变蓝则实验失败，结果发现骨髓腔注射基本上没有不变蓝的……
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顺便问下你们的微量进样器针头尺寸多大，是国产的还是Hamilton的？因为我们组很快也要进行这个实验，可能需要深入探讨实验方法，谢谢！

hyde

回复 yinchong42 的帖子* ]/ W1 ~; t- D% b  g8 r, A7 }
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溴酚蓝？是不是跑胶的条带？为什么在循环中看到颜色就失败？
8 m$ M; Z7 k/ _+ j我用的就是普通的微量注射器，国产的，需要用进口的吗？
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yinchong42

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因为溴酚蓝遇到蛋白会很快着色，所以可以更好的示踪我注射的东西到了哪里，结果发现经常会跑到循环系统中去……( E' n0 g6 H8 l5 E5 M

+ m  w( Y- `. }( A5 v" U微量注射器的话，打胫骨会不会针头太大了呢？顺便问一下你们的鼠的年龄和品种，因为我们要打2月龄裸鼠

hyde

yinchong42 发表于 2016-4-23 12:12
" k  I4 J. t5 D7 y1 D回复 hyde 的帖子
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因为溴酚蓝遇到蛋白会很快着色，所以可以更好的示踪我注射的东西到了哪里，结果发现经常 ...

/ O- m: K1 F$ W; z9 u+ g进入骨髓腔当然会进入外周血呀，多少都要进入循环的吗？针头大小还好，可以刺入，之前冲洗骨髓腔都可以用呀。

yinchong42

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& c$ r( a7 ?0 l好吧，，保持联系吧，，，
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