请教高手：为什么我分离的小鼠MSC不长？

1/3理想

我用贴壁方法，从小鼠骨髓分离基质干细胞，第一代时细胞还挺多的，就是一传代细胞就不长了，大部分都漂浮。我们用的是胰酶消化，10%的胎牛血清+DMEM请问有同样培养小鼠MSC的么？你们使用的是什么条件培养和传代？谢谢谢！

jjcd

转贴：tulip2006的回答，感谢原创. y8 X# d3 F, o5 ~
胰酶消化时间一定要把握好。这个是关键，想来你可能消化时间超过三十秒了或者胰酶中有EDTA

1/3理想

我使用胰酶消化的时候是2分钟，细胞的形态尚未发生改变，然后使用含血清的培养基终止后用滴管吹打下来的。请问这中间最可能出问题的是哪一步？谢谢！8 N3 l* v" L. K. N+ e  y
我们购买的胰酶就是含有EDTA的，这个是影响的主要原因么？

hbling2003

1# 1/3理想 * b* N% Z' h/ v+ {& P1 g, w

& ]  T- K: ?) _, ?; V; t你的消化时间如果是两分钟就感觉有点长了，一般在镜下控制其反应时间，一旦皱缩并大部分晃动后漂浮起来就要终止消化，然后低速离心

hbling2003

1# 1/3理想
( F2 ^5 w3 A7 @* R( Z
9 B& b0 X, {5 }8 p; P9 ~) G0 l你的消化时间如果是两分钟就感觉有点长了，一般在镜下控制其反应时间，一旦皱缩并大部分晃动后漂浮起来就要终止消化，然后低速离心

a180219489

我们培养的是大鼠MSC，胰酶消化3分钟没问题，一直都是这样操作，不知道大鼠和小鼠的细胞应该没有太大差别吧。3 Z$ c. Z3 w; P0 }3 i
你传代后细胞漂浮，培养液浑浊吗？有可能是污染哦！

wenfeng8212

楼主辛苦了！太感激了！多顶顶！您正在看的文章来自干细胞之家 http://www.stemcell8.cn/,原文地址:http://www.stemcell8.cn/viewthread.php?tid=2252

sailboat

如排除污染的可能，在传细胞时胰酶不能消化太久，否则细胞会受到很大影响' B' b- E9 w0 _' Y3 M  z# @
如果都没有错误，那就再耐心的等两天

why121

能了解下 大家的胰酶浓度和EDTA的浓度嘛？消化时间根据环境和温度很多原因的不同因而不同 能分别介绍下吗？最好每人都上传张图 这样好客观的去了解实验中出现的问题哦 我养的小鼠间充质感觉很不好消化 用的0.125的胰酶和0.01的EDTA一般消化3分钟有很少部分的细胞下来，很多依然贴壁 重新消化7分钟（总10分)也没下来 不太明白why 了

lchanlon

回复 2# jjcd * k% j9 d/ G9 M4 q& _+ \
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8 N% U/ m' s7 f, `& b    胰酶中有EDTA会影响间充质干细胞吗？？以前没听说过，我用的胰酶一直都有EDTA啊