人脂肪间充质干细胞传代

wuht68

大家好，我培养人脂肪间充质干细胞，胰酶消化后1：3分盘，细胞稀、培养过程中有变大变薄现象，经过20多天的培养，细胞终于长到70%的汇合度，显微镜下细胞形态还不错（长长的成纤维状），但是细胞生长太缓慢了，不知生长缓慢是否和我胰酶消化传代时有关，我把我的消化条件写下来，能否请帮我看一下：% ?* Y# P: E: q3 v6 P9 B  p/ c2 d( K
细胞为第三代人脂肪间充质干细胞% ]; {9 P% `1 L* D2 B
胰酶：0.25%胰酶+EDTA
6 V! F" X1 ]; ?" h) `' ?# N胰酶加到培养皿中，至贴壁细胞全部漂起，加完全培养液终止消化: Z6 ~/ L5 h4 W6 R" v4 f
1:3分盘（我接下来要调整为1：2）
( b  Q6 G4 g$ |. @4 ]$ Q/ g. k* n. y$ r* I3 X
能否提点意见，谢谢！  X/ _$ q; U6 |) j& s5 A) f

花饶然

我们实验室通常用0.125%胰蛋白酶EDTA，效果也还不错。脂肪细胞的生长貌似与接种密度有关的，也有个体差异，不同供体能够传代的次数也不一样，出现老化的时间不同。不知道你养的第几代，传过几次。20天汇合70%，我没有遇到过

wuht68

回复 花饶然 的帖子
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非常感谢！) w- W0 }6 F# o; S( X$ @
这个20天汇合70%的脂肪间充质干细胞是第3代，/ K1 P: F9 |( U0 q1 U$ f' F7 _) p* P
我当时1：3分盘的，细胞密度很低；
7 F" t. n6 s2 r另外，细胞生长缓慢不知是否和消化过度有关？

花饶然

第3代按道理很低了，不太会出现这个情况。可能是细胞密度低的缘故吧，你下次把密度提高点吧，消化过度肯定也会有点影响。

zhouweixing000

贴壁细胞全部飘起了那就是消化过度了，因为贴壁的细胞不完全是干细胞，也有一些杂细胞是贴壁的！至于胰酶的浓度倒是没有太大的关系，这要看你的操作速度了，只要在你的可控范围内就行。1:3这个传代比例也是适合的，不要怀疑自己！

wuht68

非常感谢！

月_幻影

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) t  A" m, M, ?3 |5 }6 b感觉楼主你消化的会不会有点过啊，一般加上胰酶待细胞变圆就可以加培养基终止消化了，然后吹打几下细胞就下来了，另外传代密度有点稀啊。

蛋蛋心月

消化过头了，一般37℃放1-2min就好了。

eric1993

胰酶用0.05%的就可以了，浓度太高会影响消化程度，从而影响细胞状态

沙漠狐o0

可否上几张图片看下细胞形态？$ s9 N5 a$ ?1 y* Q