人脂肪间充质干细胞传代

wuht68

大家好，我培养人脂肪间充质干细胞，胰酶消化后1：3分盘，细胞稀、培养过程中有变大变薄现象，经过20多天的培养，细胞终于长到70%的汇合度，显微镜下细胞形态还不错（长长的成纤维状），但是细胞生长太缓慢了，不知生长缓慢是否和我胰酶消化传代时有关，我把我的消化条件写下来，能否请帮我看一下：
  p( R( L/ R  _0 p* H! `细胞为第三代人脂肪间充质干细胞
7 r& v; R8 k( b/ W- F胰酶：0.25%胰酶+EDTA9 \: e8 G, Q+ L
胰酶加到培养皿中，至贴壁细胞全部漂起，加完全培养液终止消化2 x% U* M) E9 v. U$ o- M
1:3分盘（我接下来要调整为1：2）0 h9 P3 a/ ?; @) p7 I
- @; n" Z' {; U5 [6 s7 J2 `0 f
能否提点意见，谢谢！4 E5 ]- H3 ]% t4 f

花饶然

我们实验室通常用0.125%胰蛋白酶EDTA，效果也还不错。脂肪细胞的生长貌似与接种密度有关的，也有个体差异，不同供体能够传代的次数也不一样，出现老化的时间不同。不知道你养的第几代，传过几次。20天汇合70%，我没有遇到过

wuht68

回复 花饶然 的帖子
6 _- X. `0 c* `/ |* |8 P+ B7 z: Q1 e
非常感谢！0 K% ~% i5 ?8 C% b% Y$ ?
这个20天汇合70%的脂肪间充质干细胞是第3代，
7 b$ w2 q  _/ q7 c+ R& j2 Z我当时1：3分盘的，细胞密度很低；
/ M/ w# S7 B3 h6 [7 u2 U另外，细胞生长缓慢不知是否和消化过度有关？

花饶然

第3代按道理很低了，不太会出现这个情况。可能是细胞密度低的缘故吧，你下次把密度提高点吧，消化过度肯定也会有点影响。

zhouweixing000

贴壁细胞全部飘起了那就是消化过度了，因为贴壁的细胞不完全是干细胞，也有一些杂细胞是贴壁的！至于胰酶的浓度倒是没有太大的关系，这要看你的操作速度了，只要在你的可控范围内就行。1:3这个传代比例也是适合的，不要怀疑自己！

wuht68

非常感谢！

月_幻影

$ b& n4 v7 _# L  k, \8 [6 D
3 g0 r, e: f* \- j感觉楼主你消化的会不会有点过啊，一般加上胰酶待细胞变圆就可以加培养基终止消化了，然后吹打几下细胞就下来了，另外传代密度有点稀啊。

蛋蛋心月

消化过头了，一般37℃放1-2min就好了。

eric1993

胰酶用0.05%的就可以了，浓度太高会影响消化程度，从而影响细胞状态

沙漠狐o0

可否上几张图片看下细胞形态？
0 l5 N" t/ ^0 Z1 b. A! Z0 g: s