脐带分离间充质干细胞的问题

bin

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7 M8 x" x" x' s. u) Y! V我做过很多例脐带间充质干细胞制备，根据你的形容，基本上可以确定有三个问题，第一，接种的悬液中细胞量很少，第二，絮状物里面包裹的是细胞，絮状物极可能是DNA外泄造成的，第三，5天没有细胞贴壁，你的这次制备肯定是不成功的。一般来说酶消化比组织贴壁细胞得率更高，而且活率也很好，我做酶消化，10ml组织的量接种15cm培养皿，一周可以收集细胞了。

bin

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脐带细胞培养和制备我已经做的很成熟了，细节方面可以慢慢探讨。

细胞海洋

脐带间充质干细胞聚团，形成一大片絮状物，大家有没有遇见过，求解？？？* j( B: ~' Y3 v
http://www.stemcell8.cn/thread-71837-1-1.html2 [1 X) W7 M, M# \
脐带间充质干细胞聚团，形成一大片和水母似得絮状物，检测了支原体也没污染，求解？？# |) o+ ~% }+ l' @3 d
http://www.stemcell8.cn/thread-71836-1-1.html
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kangjian1009111

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! C0 ^9 H  X" w; f; p1 @
  }/ i  ]& {; g% M0 g% `6 H你好，我在16日的时候又分离了一根脐带，这次延长了消化时间，但到今天为止仍然没看到有贴壁细胞，这次没有絮状物包裹细胞。请教是哪里出现了问题？

kangjian1009111

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从分离到现在已经三天了，我需不需要更换培养基呢？如果换的话会不会损失一些细胞？还有就是我感觉我分的细胞里面红细胞比较多，血管要如何才能剔除干净，尤其是两个动脉血管？请指教一下，谢谢！

细胞海洋

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2357710447

我们都是用分离法直接分理处的华通氏胶来培养     如果你要用酶来消化    那样可能有点复杂   我做过胎盘的羊膜细胞消化   是放在恒温振荡器上面37摄氏度震荡消化    时间大约一个小时   过滤后培养     贴壁的细胞还是很多的    但是死细胞是活细胞的好多个倍   需要第二天全换液出去    希望对你有帮助
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Dunncao

你好。消化法的话，是直接整根剪碎消化吗？这样羊膜、血管、胶原之类的消化不完全而呈絮状就很正常了。
' _6 k3 @6 }) V6 n为什么一定要用消化呢，直接分离华通胶剪碎培养就可以了呀，首次贴壁是比较困难，我做的普遍在一周以上能观察到克隆团，但成功率基本是有保障的。' {6 @4 w: n8 }
如果一定要消化的话，也建议取华通胶消化。酶浓度和时间也要把握好。

bin

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9 x! E+ G2 p1 `, \* y5 r: |很可能是细胞没有离下来，脐带组织消化后一定要用pbs或者生理盐水稀释足够多的倍数，不然液体很粘稠，不好过筛网，也不好离心。我的经验是稀释到组织体积的10倍以上，然后2000转离10分钟，再用dmem清洗一遍就好了。
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bin

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& Q; i' d% ?* z/ F, ^" _2 L! T' m$ U/ d% m, e
当然了，消化时间不能太长，控制在2小时以内是比较合适的。至于你说的换液，我想说三天后如果没有贴壁的细胞你绝对养不活，干脆不要，留下贴壁的。脐带细胞活性很高，条件适宜的情况下会生长很快的。剥离血管是技术活，我这里没法和你说清楚的，我都是手把手教别人，不过给你一个思路，不需要先剥血管，也可以直接从脐带组织中把华通胶撕下来，剩余的就是血管组织和表皮，直接扔掉就好了。