脐带分离间充质干细胞的问题 - 间充质干细胞专区干细胞之家



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查看: 59956\|回复: 25	go 脐带分离间充质干细胞的问题 [复制链接]

kangjian1009111

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楼主

发表于 2016-7-8 09:35 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

本帖最后由细胞海洋于 2016-7-8 15:36 编辑 & V( {1 @3 G1 r6 X7 B; f

最近分了一根脐带，用胶原酶II和胰蛋白酶共同消化的方法分离的，酶消化后滤除组织块的滤液离心后不见有细胞沉淀，但有很多絮状物离心也离心不下来，将这些絮状物接种到培养瓶中，镜下看絮状物里有裹住的细胞，接种当天看不到有细胞，第二天镜下看到许多未贴壁细胞，三天后镜下看仍没有细胞贴壁且悬浮细胞增多，5天后镜下看仍没有细胞贴壁且部分细胞已经破壁，请问这个絮状物是什么？絮状物里裹住的细胞是不是MSC，如果是为什么没有贴壁？请教大家帮我解释一下，谢谢各位。

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沙发

发表于 2016-7-8 09:38 |只看该作者

没做过酶消化法的制备，一直都是组织分离法

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snowny007

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藤椅

发表于 2016-7-8 09:54 |只看该作者

我消化做的不多，根据自己浅薄的经验判断，絮状物应是消化未完全的组织，不知你血管是否剥离干净，或者是自己剪碎后的组织剩余，也有细胞聚团的可能性。没上图，不知道絮状物的大小，想去除可以用刮刀或直接吸出，损失些细胞是没关系的。我做的时候将脐带剥离后剪碎，胰酶先消化，再用胶原酶长时间消化，消化结果还可以，前几天镜下细胞不易观察，但要坚持换液，过几天可以正常传代了。

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pengxuleo

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板凳

发表于 2016-7-8 10:10 |只看该作者

这个絮状的可能是消化产生的细胞破碎造成的DNA外泄，DNA有粘性造成的。可以通过减少消化时间或者添加ＤＮＡ酶来去掉絮状沉淀

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kangjian1009111

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报纸

发表于 2016-7-8 10:14 |只看该作者

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我是先胶原酶再胰酶，这样有影响吗/ \ K, R% O# y

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kangjian1009111

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地板

发表于 2016-7-8 10:15 |只看该作者

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我的细胞感觉都是包裹在絮状物里的，如果把絮状物吸走了估计就没有细胞了

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7楼

发表于 2016-7-8 10:58 |只看该作者

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5 g& O" `/ V+ q" g4 ~
如果是细胞包裹在絮状物里，直接弄出来贴壁，不就可以了？我觉得应该不会是絮状物里包裹的间充质，这东西不会有选择性的，最多里面掺杂着少量的细胞。酶消化法，对酶、温度和时间的把控非常重要，最好多摸索几次，确定可靠的SOP。