脐带间充质干细胞原代培养密度达80%-90%后，传代时怎样将组织块与贴壁细胞分离呢？

蜗牛爱贝贝

不管你是 用T75还是T175甚至是 培养皿培养的  一般都是 用 100目的滤网过滤来分离  没有其他好的方法 目前来说  至于密度 就看个人了  原代细胞  多培养一两天 没关系

kangjian1009111

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3 @: ^4 [0 Y4 @  g请问组织块培养几天可以看见有贴壁细胞呢？我的已经三天了，可是还未见贴壁细胞？这正常吗？

yingfeixiang

回复 kangjian1009111 的帖子6 q' }* O8 Y6 G4 B/ I2 V3 K( q, ?
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怎么也得7-10天吧，三天肯定看不到

kangjian1009111

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" o5 `& J5 ?9 ~+ C1 K那中间怎么换液啊？换液会不会使组织块飘起来啊？

yingfeixiang

回复 kangjian1009111 的帖子
7 T2 L  Q3 k3 U, R9 L* @0 o0 r( ^# s3 l- u& r) j
正常换液就可以，肯定有些会飘的，半量换液就可以

woshibotao_01

如果是培养瓶可以把组织块先轻轻拍掉，注意不要剧烈的把培养基弄的起老多泡沫就好，然后用25毫升吸管把组织块吸出（因为25ML的吸管口大），然后再加入PBS清晰，再用吸管把残留的组织块吸出，加酶消化即可。传代后换液时再洗洗，组织块就基本没啥了。

只因偶然

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5 G$ \% N+ C4 n. Q9 b: [& u+ p/ X
) x' }) Z/ F# z8 q  q! L终止酶消化是用新鲜培养基还是用培养过的培养基

2357710447

回复 sryanhong 的帖子3 _: l6 Y2 f) Y
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1.5~2.0X10*6就可以了   细胞太多了长出来的形态很差

只因偶然

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前期一般是几天换一次液，要是有些组织块还没爬出干细胞，倾斜换液时组织块会不会滑动到底部？

cxs

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4 o# }$ S/ D, _* P* A8 I( q9 p
% v4 t# X! n- w2 t6 A! p& W& Z我们养在T75瓶，相对还比平皿麻烦一点，我们是这样的：前期等它贴牢了之后加入10ml培养基，之后试过5天才换液都没问题，爬出来状态也很好。也试过3天换液，也爬出来了，并且感觉区别不大，我们这几天压根就没去理它，关键就是少动它。等到细胞爬得多了，就要按养细胞的换液频率来了。换液的时候我们就是轻侧，用巴氏管小心吸取，多少会有一些损失，但不要在意，丢了就丢了。并不是所有脐带都能爬出来，也并不是所有组织块都能爬出，及时止损，别浪费时间。祝顺利！