脐带间充质干细胞原代培养密度达80%-90%后，传代时怎样将组织块与贴壁细胞分离呢？

sryanhong

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脐带间充质干细胞原代培养密度达80%-90%后，传代时怎样将组织块与贴壁细胞分离呢？如果直接消化贴壁细胞和组织块还是混在一起的，是不是需要过滤一下呀？还是有别的好方法？求指教

yingfeixiang

原代培养过程中，在间充质干细胞有一定克隆长出后，就可以去除组织块了，让原代培养密度达80%-90%后，传代，如果组织块还有可以70-80目细胞晒网过滤一下

2357710447

回复 sryanhong 的帖子& }1 Z1 n3 z2 x; T2 g" y# S
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原代组织块培养在T75瓶里      当细胞生长到瓶子的四分之一左右时即可传代     用0.125%的姨酶消化两分钟   100目的滤网过滤    计数    培养到新瓶子里面就可以了

单个核细胞

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8 u, _6 W3 \0 S; E  w  r& h! |! t8 `轻轻拍打使大部分组织块脱落，连同旧液直接倒掉，再用PBS浸洗，弃去PBS后就可以消化收集细胞了，可以将细胞悬液用滤网过滤下再离心，也可以直接离心，然后传代。

随时准备下线

根据组织块大小选择是否过滤。组织块较大的话，直接用尖头镊子取出就可以了。还有，一般在传代前2天就应该把组织块移出，而不是一直等到长满之后才移除。

cxs

如上面各位所说，大的组织块我们在传代之前就移除了，用PBS润洗，拍打下基本就下来了。剩下极小的我们没移除，传一代会有部分很小的组织块残留，此时已经不是贴壁状态了，很容易就在换液过程中去除，传二代基本就看不到了。个人见解：除非你要用的就是严格无组织块的原代或者P1，否则没必要浪费过多精力在这上面。

sryanhong

回复 2357710447 的帖子6 M  Y# e: ?$ C$ o3 N2 B, U  L! S$ [
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想大量培养，用T-175的瓶子会对原代间充质干细胞有影响吗？
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蚂蚁上树

等组织块爬出来的换液的时候，就可以用PBS稍微冲一下，等到传代时，如果还有残留，消化下来，用筛网过滤下

sryanhong

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传代时，一个T-175的培养瓶接种多少细胞呢？

鸵鸵

我们实验室是用PBS清洗组织块2次，轻缓晃动培养皿，一般能将组织块冲洗下来，如果还有残留，可以将细胞消化，用培养基终止消化后，用移液枪吹打掉组织块，然后吸出移除，此步骤要把控好枪的力度，以防用力过猛将组织块吸到枪里