间充质干细胞原代细胞少

yingfeixiang

最近一直养脐带MSC，采用贴块法培养，但细胞长得不好，150mm培养皿只有2~3块爬出细胞，原代细胞数特别少，请教是什么问题？
+ B/ X7 E0 {0 ~0 e1 c; S7 o+ Y  S- K8 `! e$ Q: K
具体操作：; L. x0 W$ S$ @" b! ]. M, x, J
1、脐带PBS+双抗洗3遍后处理，剥离血管。0 G1 I) p6 c. S' @
2、洗洗剪碎成2-3mm左右小块。) H7 z5 T; I4 k8 Z3 {) m* k
3、组织块用2ml润湿过夜贴壁，培养皿补液至15ml，三天换液一次。
$ [+ ]4 g/ O, G8 b9 e3 e3 s$ b4、培养液：DMEM+10%FBS+双抗。
/ G% \8 b7 D" D  g* H6 Q! C5 \  n/ [3 \. `  i# ?: l
以前也是这么培养的，相当好了，现在原代细胞爬出量特别少，是什么原因呢

随时准备下线

按你的思路来，跟操作、试剂等都没有关系。原代培养多少天？

yaolinzhang

回复 yingfeixiang 的帖子
( P. M0 P9 o6 @- e! X
/ _- M, r2 }, Z个人建议：
  {, N, w* Y+ r" S6 p, S1.换脐带试试，MSC存在个体差异；
; r; }( C- o, M( Z# ^# q) c2.尽量缩脐带短处理时间；. U% ~$ M: z2 H$ [2 s8 p
3.优化培养基（尤其FBS，最好选用较好的公司，比如gibico）

yingfeixiang

回复 随时准备下线 的帖子
/ e6 S8 v2 v! f/ ]6 l( ^4 l$ f7 k( w/ u! z6 G# \0 d
原代14天处理的，计数特别少，不是一份，好几份都这样，就一份细胞养得好，其他原代的都特别少

yingfeixiang

回复 yaolinzhang 的帖子+ K: X$ ~4 k3 h
! _( J, r2 V8 i5 x0 t5 X" @
做了好几个了，就一个养得好，其他原代都不好，FBS一直是gibico，DMEM是hyclone的。所以郁闷呀

随时准备下线

回复 yingfeixiang 的帖子! a1 T; f2 V7 H4 c8 ?
4 ^8 x% k4 W" h6 i
不行就试试只要华通胶贴壁，一般这个都比较快。

yingfeixiang

回复 随时准备下线 的帖子
9 B* }# S& `0 {; i9 B3 a$ ], u4 j. v$ F* A* D% }7 w% z
单独剥离华通胶，这个到是也行。现在就是原代少，传代长的也不行

Llxue

试试间隔久一点换液呢，我们是第四天半换液，第七天才全换液，后面每三天再操作，到目前为止细胞都长势挺好的

2357710447

前面两次全换   5天一次   需要离心    后面半换3天一次   前期不要随时去移动培养瓶    影响胶块贴壁    建议你把培养基的量减少一点   这样贴壁的胶块会增多   爬出细胞的几率也会增加   如果你在第二次全换的时候看到贴壁的胶块还是很少的话   一定要减少培养基   让它赶紧贴壁   否则时间太长长出来的细胞形态很差   希望对你有用

Dunncao

个人的经验觉得有几个问题：, e' a# b& _& |" P/ U# I
1、只取华通胶；
# N" Y2 v( r* N9 _2、组织太大，我正常都会剪成糜状；
' {/ d" n0 g) r8 Y9 `& I3、我不太清楚少量培养基过夜是参考的哪里的做法，个人是一次加够；
# D' {) y4 B+ j4、脐带干首次贴壁比较困难的，反复地观察、换液会造成极大的影响。个人操作是静置5天以上再观察，视情况定后续操作。