求助各位亲，PBMC分离出来红细胞过多，如何再尽量PBMC损失最少的情况下减少红细胞呢？

免疫与细胞

不建议使用红细胞裂解液，加入步骤过多，此外红细胞裂解液还会影响PBMC。1：1添加ficoll离心，吸取时注意就好，这个需要练习。

修行

假如只是这个血是这样的那可能就是血的问题，血象对分离有一定的影响，有些血会出现红细胞分开的情况。假如经常出现这样的情况，那就要考虑一下你们的方法问题，Ficoll离心要点就那些，多注意把控就行。自己多总结多分析会有好处的。

小沙弥敲木鱼

最主要的是降速调到最低，效果会很好。

sfnana

不建议使用红细胞裂解液，对PBMC细胞也有损伤。使用品质较高的ficoll(GE的),控制好ficoll与血的比例（>=1:1），加血时一定要缓慢匀速加入。调好离心速率，根据实验室离心机的特点调节好升降速。离心分层后，小心吸取白膜层，原则宁可少吸一点，也不要吸到下层的红细胞层。

biluolinyu

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& p- o- U$ ~! S  |. W请问FICOLL管使用前离心是为了使管壁上黏附FICOLL全部落回到管底部么？

伊诺强

回复 biluolinyu 的帖子% p8 ]( g5 h7 v4 s/ Z9 g
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是的。新分装的ficoll或者之前已经分装离心过的ficoll管，时间长了会蒸发挂壁，影响分离效果。

biluolinyu

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谢谢

xiaodiao123

我们平常提取也会有红细胞，当然肉眼可见。但其实并不影响后续培养，继续培养一段时间后，红细胞就会慢慢裂解了，基本到十天左右差不多，基本不影响后面的实验

sky512829

现在都有配套离心管加分离液后再加入外周血，分离后，细胞直接倒出来