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骨髓里是由大量免疫细胞的，至少你可以看见红色的血，如果你做骨髓连免疫细胞都没考虑过，我也是不好说什么了，2 V# T q! J& I' B! S% N
我以前做的时候，用的四周的鼠，体重数具体记不清了，你可以在网上查一查，( N0 c* i6 A I* Z' M0 T& P
细胞分完铺板，8-12小时就要观察了，如果观察看到已经有贴壁梭形细胞，那就是要全换液的，以后也是每两三天就要全换液，
8 e9 E9 u1 C) M r* t4 e) `目的是防止过多的巨噬细胞等贴壁干扰实验，当然如果观察没有细胞贴壁，那就先不换液，保持跟踪观察，毕竟动物之间的差异也挺大，
+ n: T9 f# y' i5 V E4 Z# b7 Z根据你的描述，我们的方法不同，也许是要做的实验不同，你的做法或许也应该有你的道理，
8 B* F, k! F$ H1 V% `8 h关于消化，不知道你为何用这样的办法，我们是从来不这样做，两遍胰酶更是闻所未闻，
: _1 S" q8 |$ T4 I个人以为，正常的消化流程是弃掉废液，用合适的PBS轻轻洗涤，之后去除，
3 z; M7 _5 z8 l8 d) V( F7 i' x然后加足量胰酶，0.125-0.25%都可以，让胰酶轻轻覆盖全部细胞，室温停留1-2分钟后吸去，之后瓶子放培养箱3-5分钟，3 `& y! _9 i" |5 n5 C% C$ E
然后用足量的10%完全培养基轻轻吹下瓶中的细胞，离心去掉上清，用新鲜的培养基重悬细胞，之后计数，根据传代培养的容器，按照适宜的密度接种细胞，
1 s; O* n; x0 [( b" }关于流式鉴定应该是必须要做的，不知道你分细胞要干什么用，但不论你干什么用，都要先做鉴定，这是最基本的，
0 X9 @2 ?% e0 a/ J如果不是很严格的实验，不用要求太多，但间充质和造血干的几个分子标志必须要有，例如CD11b、29、34、44、45、73、90、105、133，还有HLA-DR，
: {% B; _2 D0 k7 L5 k' ]. x3 v' N什么细胞才是间充质干细胞，不能只看长得像不像，还要有分子标志的表达量符合要求，譬如阳性的应该超过95%，阴性的要低于2%，9 i, F, Z- J' F* \" q' w/ J
你所说的不划算的说法，真是让人匪夷所思，如果你都不知道你获得的细胞具体什么情况，你能用它们来干什么呢？
! I0 i l5 H' Z- G另外，你纠结的操作问题，或许还要想一想，使用的培养容器是不是适合细胞生长， z+ {3 r" t4 W, }
你的培养基或者血清是不是放的时间太久，长时间使用和多次开启之类的操作是否导致谷氨酰胺失活或者pH改变等等，
& c, |1 F; h x. N3 b说的不客气一点，个人以为，做实验之前，要详细查资料，把东西买齐，设计好方案，之后再开始做，不然既浪费时间浪费经费还折磨自己。 |
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发表于 2016-9-22 16:32
