我们实验室细胞传代的一般方法

dflove

这一方法较简单，不需要离心，而且消化后细胞很少聚集成团，具体步骤如下：( m* Q+ f% f) H( q$ L9 h* P

% _/ n" x. f$ v2 ?) u1、吸尽待传代细胞瓶内的培养液，按1：1 的比例加入适量0.25％胰酶和0.0 2％EDTA（一般100ml培养瓶各加2滴管消化（消化时不要晃动培养瓶，以免消化不完全而导致细胞成片脱落，从而导致细胞成团，无法吹散）。1 s2 O$ f  U" u# P6 h
$ O9 ]& \0 c. \( q7 z, b- o" }
2、消化致细胞变圆，细胞相互脱离接触但还未从瓶壁脱落时，吸尽胰酶和EDTA。* K! n/ J6 _& `$ N
9 U# b5 W+ |7 s
3、利用残留的胰酶和EDTA继续消化数分钟。7 W, s5 Z& d! J

" f* ^% q, t5 {0 }4、加入适量培养液，反复吹打，然后分别接种致新的培养瓶。: Y. o7 m8 P+ a; M1 g* a0 c
' C1 P8 o* i0 ~6 _) F. z
注：消化的时间需根据不同细胞摸索确定。

hualin840518

kejia0422

如果细胞还未脱离，残留EDTA不用hanks冲洗啊，不过中间的度不好掌握倒是

have-a-rest

各有各的窍门。
6 I! K$ }7 Z8 `: l; i7 Q不过我不会选择这种方法，离心不会耽误什么事。我曾偷懒，血清终止胰酶后直接传代，没有离心，结果细胞状态和之前方法处理相比差了许多。当然你是把消化液吸出了，但还有问题：度不好掌握；毕竟还有trypsin/EDTA残存，对细胞的影响可以完全消除吗？

bobo10679888

大同小异

jiefengbing

第一次见到这么传代的方法，假设有胰酶残留，会影响以后的细胞生长吧。当然后面培养液的血清可以终止胰酶的作用，你这种方法的优势在哪？有时候，细胞数目跟生长状态跟经典的方法没什么区别，但细胞内部结构或者是否癌变，你是否考虑？我还是比较信可终止消化后离心这种方法。

sandradexin

EDTA可以用血清终止吗？

饶冠华

, K" j, A2 A4 |$ p% E

, T4 W. S# |: ~: Z. M& D我们实验室的方法和你的就有一点点差异：
* R' ]# K) U7 H# d# U. O( V' x3 Y" D# h4 R
我们是吸尽培养基之后先加入2~3ml EDTA冲洗20~30S，然后吸尽EDTA，再加入2~3ml胰酶 冲洗 10S左右，同样吸尽胰酶（或者留少许），放入培养箱数分钟，待细胞变圆， 加培养液终止消化，然后分瓶培养。（不离心）0 z5 Q# A  }9 [

3 C7 Q4 u, t$ u注意： 这里所指的冲洗并不是使劲用移液器吹打，而是轻轻地晃动培养瓶。7 F) L/ g7 q9 Z, f  S: H
7 H; K( B3 L5 R' p
这样先EDTA 后胰酶 就可以除去残留的EDTA  而少许胰酶残留对细胞几乎没有影响。

jimmy88cn

用过类似的方法，但通常不加EDTA(特别难消化的细胞除外）。

xxkldf

残留EDTA