我们实验室细胞传代的一般方法

dflove

这一方法较简单，不需要离心，而且消化后细胞很少聚集成团，具体步骤如下：
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1、吸尽待传代细胞瓶内的培养液，按1：1 的比例加入适量0.25％胰酶和0.0 2％EDTA（一般100ml培养瓶各加2滴管消化（消化时不要晃动培养瓶，以免消化不完全而导致细胞成片脱落，从而导致细胞成团，无法吹散）。
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2、消化致细胞变圆，细胞相互脱离接触但还未从瓶壁脱落时，吸尽胰酶和EDTA。7 q! Y* I5 h4 M- `1 t
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3、利用残留的胰酶和EDTA继续消化数分钟。
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4、加入适量培养液，反复吹打，然后分别接种致新的培养瓶。
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8 z' ^4 y4 @9 n* j注：消化的时间需根据不同细胞摸索确定。

hualin840518

kejia0422

如果细胞还未脱离，残留EDTA不用hanks冲洗啊，不过中间的度不好掌握倒是

have-a-rest

各有各的窍门。
# L9 A1 a0 z3 c不过我不会选择这种方法，离心不会耽误什么事。我曾偷懒，血清终止胰酶后直接传代，没有离心，结果细胞状态和之前方法处理相比差了许多。当然你是把消化液吸出了，但还有问题：度不好掌握；毕竟还有trypsin/EDTA残存，对细胞的影响可以完全消除吗？

bobo10679888

大同小异

jiefengbing

第一次见到这么传代的方法，假设有胰酶残留，会影响以后的细胞生长吧。当然后面培养液的血清可以终止胰酶的作用，你这种方法的优势在哪？有时候，细胞数目跟生长状态跟经典的方法没什么区别，但细胞内部结构或者是否癌变，你是否考虑？我还是比较信可终止消化后离心这种方法。

sandradexin

EDTA可以用血清终止吗？

饶冠华

" ~5 L; A! Q# ~: L2 d" [
  P) r: _5 l: |3 l' z# f我们实验室的方法和你的就有一点点差异：
3 h; @1 t" P; N9 j2 O
7 ^- }2 C7 d8 r: |8 b' W我们是吸尽培养基之后先加入2~3ml EDTA冲洗20~30S，然后吸尽EDTA，再加入2~3ml胰酶 冲洗 10S左右，同样吸尽胰酶（或者留少许），放入培养箱数分钟，待细胞变圆， 加培养液终止消化，然后分瓶培养。（不离心）
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注意： 这里所指的冲洗并不是使劲用移液器吹打，而是轻轻地晃动培养瓶。8 \+ s* M( a6 n$ D" u  M! g

6 s: R9 O; t# d; t) r; i这样先EDTA 后胰酶 就可以除去残留的EDTA  而少许胰酶残留对细胞几乎没有影响。

jimmy88cn

用过类似的方法，但通常不加EDTA(特别难消化的细胞除外）。

xxkldf

残留EDTA